题目：Thrombospondin-1 counteracts the p97 inhibitor CB-5083 in colon carcinoma cells
期刊：Cell cycle
作者：Nam-Gu Her, Santosh Kesari & Elmar Nurmemmedov
单位：韩国放射医学研究所放射生物医学研究院
前言：
    在抗癌治疗过程中，癌细胞对蛋白酶体抑制剂的耐药性会使得抗癌疗法在临床应用中无效。但潜在的机制仍需进行深入的研究。
    由于p97在蛋白质稳态调节中具有重要的功能，抑制p97能够引起细胞的蛋白毒性应激，因此研究人员最近将其作为癌症的治疗靶点并进行相关的研究。CB-5083是一种有效的、选择性的ATP竞争性p97抑制剂。已有多项研究表明，CB-5083的抗肿瘤活性与p97 mRNA和蛋白表达水平密切相关。但是，细胞对p97抑制敏感性的潜在调节机制仍未得到充分的研究。
    在本文中，研究人员证明血小板反应蛋白-1（THBS1）是一个CB-5083上调的基因，有助于赋予HCT116细胞对CB-5083的抗性。CB-5083能够显著增强THBS1的稳态丰度。阻断THBS1诱导使细胞对CB-5083介导的生长抑制敏感。抑制THBS1导致CB-5083诱导的Caspase 3/7活性增加，表明其功能与p97抑制下的癌细胞存活有关。总体而言，本文证明了THBS1在细胞对p97抑制的敏感性上起着重要的作用。
 
本文用到的实验方法如下：  
结论：
    本文通过多种方法研究表明，THBS1通过增加其蛋白表达水平对p97的抑制提供了保护机制，从而提示了对p97抑制治疗的新抗性机制。THBS1提供了保护性内质网应激反应，能够发挥与ERAD相反的功能，并能使得细胞逃逸凋亡。当敲低THBS1后，HCT116细胞对CB-5083的抑制敏感，并且研究结果也表明，si THBS1的作用只有对CB-5083处理后的细胞作用明显，且细胞无法获得p97抑制剂的耐药性。
    总而言之，本文为CB-5083的治疗潜力及其耐药机制提供了新的见解。

文中对细胞增殖的测定是通过自动细胞计数仪FACSCOPE B每隔24h对细胞进行计数得到的结果，结果如下图所示：
那么FACSCOPE B有何种优势呢？
    FACSCOPE B是一种基于明场显微镜技术的全自动细胞计数系统，用于哺乳动物细胞计数。FACSCOPE B 采用高功率LED光源， CMOS图像检测 (5MP)， 精准的XYZ轴以及 on-slide图像处理技术，能用于快速准确的细胞分析。
    使用FACSCOPE B进行细胞计数分为3步，(1)细胞染色，(2)上样，(3)计数。细胞与台盼蓝染料混合，以区分活细胞和死细胞。将染色的样品加入一次性塑料计数片中(每张计数片4次测试)，并将计数片插入FACSCOPE B进行计数。插入计数片后，光学系统自动聚焦在计数片上，然后FACSCOPE B自动采集和分析图像。精确的XYZ轴通过预设路线移动，为每个通道拍摄多个图像。高灵敏度的CMOS传感器采集明场显微镜图像，并将图像发送到集成系统进行图像处理和分析。整个计数过程需要2分钟，计数结果显示在仪器正面的LCD面板上。