郁金香碎色病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
Tu lip  b reaki ng  Pot y vi rus   P ro be  RT - q P C R  K it
产品及特点

本试剂盒可用于检测郁金香碎色病毒。郁金香碎色病毒（Tulip breaking Potyvirus ， TBV）属马铃薯 Y 病毒科马铃薯 Y 病毒属，只侵染郁金香属(Tulipa spp.)和百合属(Lilium spp.)植物，导致郁金香和百合的花瓣和叶片出现斑驳的杂色条纹，感染 TBV 的郁金香不 仅表现出花色杂色，而且植株也会退化。本产品是根据探针法荧光定量 RT-PCR 原理开发 的郁金香碎色病毒检测试剂盒，它具有下列特点：
1.   即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。
2.   引物等组分经过优化，灵敏度高。
3.   提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.   特异性高，引物是根据郁金香碎色病毒 RNA 序列高度保守区设计，不会跟其他 病毒的 RNA 发生交叉反应。
5.   既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5 个 数量级。
6.   本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
7.   本产品只能用于科研。
 
成分规格

产品组成	编号	规格
2 × OneStep Probe Mix	021101a	550 μl
OneStep Probe Enzyme Mix	021102b	55 μl
DEPC-H2O	070401	1 ml
荧光模板稀释液	070407	1 ml
郁金香碎色病毒 RT-qPCR 引物-探针混合液	1525190yp	210 μl
郁金香碎色病毒 RT-qPCR 阳性对照 (1×10E8  拷贝/μL)	1525190pc	50 μl

 
保存条件

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试 剂。

使用方法
一、RNA 提取(样本制备区)
用自选方法提取纯化样品 RNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。建 议使用病毒基因组 DNA/RNA 提取试剂盒（Cat:GZ010702-50）提取 RNA。

二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
（由于阳性对照浓度高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，避免污染样 品或本试剂盒的其他成分）。
1.    标记 6 个离心管，分别为 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
2.    用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光模板稀释液，（最好用带芯枪头，下同）。
3.    在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL  的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟， 得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.    换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.    换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.    重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。 若无需制作标准曲线，将阳性对照稀释到 1×10E5 拷贝/μL 即可。

三、试剂配制(试剂准备区)
若有 N 个待检样品，准备 N+2 个 qPCR 管(N 个待检样品+1个阴性对照+6 个阳性对 照) ，向各 qPCR 管中分别加入下列成分。

成分	样品管 N+2 个	qPCR    阴性对照	qPCR    阳性对照
2 × OneStep Probe Mix	各 10 μL	10 μL	10 μL
OneStep Probe Enzyme Mix	各 1 μL	1 μL	1 μL
郁金香碎色病毒 RT-qPCR  引物-探针 混合液	各 4 μL	4 μL	4 μL