红曲也叫红曲红、红曲霉、红曲米等,其作为一种天然发酵产物,其成分相对复杂,包括多种具有生物活性的物质。其用糯米蒸制后接种红曲菌种,发酵繁殖的,产品是发酵后的暗红色糯米,经粉碎后成为红曲粉。它在食品工业中应用十分广泛,南方做烧肉或豆腐乳多使用。
同时,红曲还具有降压降脂、活血化瘀、健脾消食的功效。在保健品和药品中也有广泛应用。
1、降压降脂:红曲可以降低血液黏稠度,提高血管舒张能力,恢复血管的弹性,降低血管的外周阻力,促进血压平稳下降。而且红曲中还含有他汀类物质,能降脂。所以红曲具有调节血压、降低血脂的功效。
2、活血化瘀:红曲可以活血化瘀,主治产后恶露不尽、瘀滞腹痛、跌打损伤。
3、健脾消食:红曲可以健脾消食,主治饮食停滞、胸膈满闷、消化不良或赤白下痢。
红曲的相关标准:
根据国家标准GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》及其增补公告,红曲米及红曲红作为着色剂可用于腐乳、碳酸饮料 、果冻、糕点、配制酒等多种食品中,其中风味发酵乳中的最大使用量不得超过0.8 g/kg,糕点中的使用量不得超过0.9 g/kg,焙烤食品馅料及表面用挂浆不得超过1.0 g/kg,其他允许使用的食品则可根据生产需要适量使用。
另外鉴于红曲中桔青霉素的危害,国家也设定了限量标准,GB 1886.181-2016《食品安全国家标准 食品添加剂 红曲红》中规定红曲红中桔青霉素的限量为0.04 mg/kg。
桔青霉素亲和柱简介
参考《GB/T 5009.222-2016 食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定》,样品经提取液提取、过滤、稀释,然后通过键合有桔青霉素特殊抗体的免疫亲和柱。此时,桔青霉素被亲和柱中的抗体特异性吸附,用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去,然后用甲醇使抗体变性,从而将桔青霉素从亲和柱上洗脱下来。最后,用HPLC或液质方法进行定量检测。桔青霉素亲和柱规格:
柱容量:100ng/250ng
包装:25支/盒,1ml,3ml
保存:2-8℃
保质期:18个月
使用对象
本方法适用于红曲制品、粮食、食品、饲料、调味品、药材和酒类等样品中桔青霉素的测定
实验溶液制备
1) 提取液,甲醇/水(7+3):取70mL甲醇加30mL水,混合均匀。样品前处理:
1、红曲及其制品:
称取5g磨细的样品,置于250mL锥形瓶中,或匀质杯中。加入100mL甲醇/水(7+3)溶液。以均质器高速匀质提取2min。将提取物到入槽纹滤纸或普通滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取1mL上步的滤液,置于干净的容器中。用39 mL pH 7.0 PBS溶液:稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。2、大米,玉米,辣椒等
称取10g磨细的样品,置于150mL锥形瓶中,或匀质杯中。加入50mL甲醇/水(7+3)溶液。以均质器高速匀质提取2min。将提取物倒入槽纹滤纸或普通滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取1mL上步的滤液,置于干净的容器中。用49 mL pH 7.0 PBS溶液:稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
亲和柱净化程序:
将上步10 mL滤液,以1滴/秒的流速全部通过免疫亲和柱,直至空气进入到亲和柱中。用10 mL pH 7.0 PBS溶液或0.1%吐温 20-PBS溶液以1-2滴/秒的流速淋洗亲和柱。用1mL 洗脱液(甲醇-0. 1% 磷酸溶液70+30)以1 滴/秒的流速淋洗亲和柱,将所有样品洗脱液收集于玻璃测试管中,混匀,注入HPLC检测。
液相色谱条件:
色谱柱:Cloversil-C18 4.6*150mm(5um)
流速:0.8mL/min
检测器:荧光检测器,激发波长350nm,发射波长500nm;
进样体积:20~100uL
流动相1:0.1%磷酸:乙腈=35:65(V/V)
流动相2:流动相 A 液:乙腈,流动相 B 液:0. 1% 磷酸。
流动相及梯度洗脱条件见表
时间 /min |
乙腈 / % |
0. 1% 磷酸 / % |
0 |
40 |
60 |
1 |
40 |
60 |
7 |
90 |
10 |
9 |
90 |
10 |
10 |
40 |
60 |
15 |
40 |
60 |
实验图谱及数据:
高效液相色谱仪桔青霉素标准品(50ppb)谱图如下:
红曲粉样品加标(2000ppb)谱图如下:
红曲粉样品1 |
红曲粉样品2 |
|
本底(ppb) |
0.00 |
845 |
加标2000ppb |
2026 |
2820 |
回收率 |
101% |
99% |
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检测桔青霉素产品配置清单:
编号 | 产品货号 | 产品名称 |
1 | IAC109 | CLOVER桔青霉素亲和柱(配套盐包PBS缓冲液),3ml/1ml,25支/盒 |
2 | ZJ0612 | CLOVER多位泵流操作架, 包括以下部件:1、一个12位操作架。 2、一个空气泵。3、6个10ml玻璃注射器。4、连接头和塑料软管各6个。 |
3 | CNtest9042 | CNtest桔霉素标准溶液,100ug/ml,1ml/瓶 |
4 | C546150-U | HPLC Column:Cloversil Myco-C18, 真菌毒素色谱柱,5μm, 4.6×150mm |
5 | C546250-U | HPLC Column:Cloversil Myco-C18, 真菌毒素色谱柱,5μm, 4.6×250mm |
6 | 36020C | Filter Funnel, 65mm塑料漏斗,10 个/包 |
7 | 36010 | CLOVER一次性塑料烧杯,25个/包 |
8 | 31240C | CLOVER折叠槽纹滤纸,100张/盒 |
9 | 31955C | CLOVER玻璃微纤微滤纸,100张/盒 |
10 | 34000C | CLOVER一次性测试管,250支/盒 |
11 | 20202 | 带1.1升不锈钢均质杯的均质器,220V,可定时 |
12 | YQ-CL200 | CLOVER 多管涡旋混匀仪(500-2500转/分钟) |
13 | CL-BC9002 | 9-425进样瓶盖包含盖垫,一字开口,100个/包 |
14 | CL-SB9002 | 9-425透明进样瓶,带刻度,2ml,100只/盒 |
15 | CL-SB9004 | 9-425棕色进样瓶,带刻度,2ml,100只/盒 |
16 | CN13N22 | CLOVER有机系针式过滤器φ13, 0.22um,100个/桶 |
17 | CN13M22 | CLOVER水系针式过滤器 φ13,0.22um,100个/桶 |