来源：实验老司机

1 实验原理

瑞士卷制片结合 HE 染色是经典的肠道全层结构观察方法。通过将结肠卷曲成瑞士卷形态，可在单一切片中完整展现黏膜层、黏膜下层及肌层的连续病理变化（如炎症、隐窝结构异常等）。该技术尤其适用于小鼠模型肠道疾病研究，具有保留全结肠组织、维持组织结构完整性、简化制片流程等优势。

结肠瑞士卷的免疫组织化学染色代表性图像

（图片来源：https://doi.org/10.1016/j.mex.2022.101630）

传统方法局限性：

• 国外方法：既往研究多参考 JOVE 实验视频指导，采用木棍机械顶出肠内容物后冲洗，此过程易因机械力损伤肠黏膜结构，影响后续病理观察。
• 国内方法：需沿中线剖开肠管后冲洗，但对操作者技术要求较高，若未精准沿中线解剖，易导致肠管形态不规则，造成检材浪费。离体肠管痉挛问题：肠道离体后因去神经化发生痉挛，直接冲洗时肠内容物难以排出，且操作不当可能撕裂组织，破坏完整性。

瑞士卷技术改进：

本方法通过保留系膜缘侧结构，保留在体神经支配，避免肠管痉挛，并优化冲洗流程，避免机械顶压和剖解操作，有效减少黏膜损伤；同时利用肠道自然张力完成冲洗，确保组织形态完整，为病理分析提供更可靠的样本基础。

2 实验材料

• 耗材：1 mL 移液器及枪头、眼科镊、手术剪、冻存管
• 试剂：PBS 缓冲液、krebs 液（可选）、4% 多聚甲醛固定液
• 设备：解剖台、冰盒、显微镜（可选）

3 实验步骤

3.1 小鼠处死与腹腔暴露

1.禁食处理：实验前根据实验需要看是否需 12-16 h对小鼠进行禁食（不禁水），减少肠内容物干扰。

2.颈椎脱臼法处死：快速处死小鼠，立即置于解剖台，75% 酒精消毒腹部。

3.解剖操作：沿中线剪开腹壁，暴露腹腔，定位回盲部囊袋样结构，确认远端结肠（粗细交界处）。

3.2 结肠冲洗与分离

1.肠管切断：在结肠粗细交界处（系膜缘侧保留约 2 mm）剪断肠管，避免损伤系膜血管。

2.冲洗技巧：

• 用 1 mL 移液器吸取 PBS 或 krebs 液，水平插入肠管断端（保持移液管与肠管方向一致，避免成角）。
• 轻柔推注液体，观察肠内容物排出，确保结肠无明显扩张。可通过流出的清亮液体，判断是否冲洗干净，一般2-3次冲洗即能达到满意效果。

3.解剖系膜：沿肛侧方向剥离系膜组织，完整游离结肠至肛门端。

3.3 瑞士卷制片

1.组织固定：将冲洗后的结肠立即浸入 4% 多聚甲醛固定液中，室温固定 24 h。

2.卷曲制片：

• 取固定好的结肠，置于滤纸上，用眼科镊将肠管末端向系膜侧卷起，形成紧密的瑞士卷结构。
• 用细线固定卷芯，放入包埋盒中进行石蜡包埋。

3.切片染色：切片厚度 4-5 μm，进行 HE 染色后封片观察。

4 注意事项

• 处死小鼠后需快速操作，避免组织自溶。
• 冲洗时压力不宜过大，防止肠黏膜损伤。
• 瑞士卷卷曲过程中需保持肠管自然形态，避免过度拉伸或折叠。
• 系膜剔除需彻底，以免影响切片质量。