来源：药研课堂

主要介绍小鼠皮下成瘤模型和肿瘤转移模型（以BABL/c裸鼠为例）。

01

皮下成瘤

实验原理：肿瘤细胞具有极强的增殖能力，在一个适宜的环境中就能够实现细胞增殖分裂。免疫缺陷小鼠成瘤是最常见的验证肿瘤细胞体内增殖模型。由于大部分肿瘤研究使用到的是人类来源的细胞，种植到免疫正常的动物体内会发生免疫排斥反应，所以需要用免疫缺陷型小鼠作为成瘤模型的动物。

动物准备注意事项：以BALB/c裸鼠为例，

• 需要事采购4-6周龄的SPF级别小鼠（周龄过大细胞成瘤率降低，过小动物容易死亡）。
• 小鼠性别选择，依据实验要求，特殊的需求偏向选择（例如宫颈癌则选择雌性，前列腺癌则选择雄性。没有指定要求则可参考文献选择或预实验雌雄对半。
• 设置实验时因考虑动物成瘤率问题定量，一般设置需要数量的1.5倍。

实验步骤：1. 收细胞：预先将细胞接种到培养皿并于 37℃、5%CO2 的培养箱中培养，待对数生长期的细胞生长达到 80-90%，弃去培养皿中的培养基，用无菌预冷 PBS 冲洗两遍，加入 0.25%胰蛋白酶-EDTA1ml 到培养皿中消化细胞，静置约 2-5min，用倒置相差显微镜观察细胞消化状态，待镜下细胞出现晒网状空隙时加入 2-3ml 完全培养基终止消化，用移液枪轻轻吹打，使细胞悬浮，收集细胞悬液至离心管，并使用离心机 1000r/min 离心 5min，弃去上清，用预冷无菌 PBS 洗两遍，再加入预冷无菌 PBS，轻轻吹打细胞沉淀，混匀成细胞悬液，用细胞计数板计数细胞，重悬细胞至密度为 1×107 个/ml（可根据接种细胞密度调整为其他浓度），最终将细胞悬液至于冰上暂存。Tips:

1. 细胞活率＞90%
2. 接种数量：e5-e7(视情况而定），＜e5不成瘤或难以成瘤，注射体积＜0.2 mL

2. 皮下接种：在超净台上，选择血供丰富的区域（腋窝中后部或者腹股沟中上部），用 75%酒精消毒需要注射的部位。接种前使用移液枪将细胞悬液充分吹散，用注射器吸取细胞悬液，于注射部位的皮下进行接种。（有毛小鼠因事先剃毛）3. 结果观察：接种完成后，无菌环境下正常饲养接种的裸鼠，每隔 3-4 天用游标卡尺测量肿瘤的最长以及最短径线，计算并记录肿瘤的体积大小（如果有条件，可以同时称一下裸鼠体重）。根据接种细胞的特性以及接种细胞的量，选择合适的时间取皮下瘤（通常是接种后 3-6 周，瘤子不大于 1500 mm3），用天平秤称量并记录最终瘤子的重量。最终可根据实验需求处理皮下瘤，比如提取 RNA 和蛋白，或者用福尔马林固定后做免疫组化、免疫荧光等。裸鼠成瘤瘤子体积计算公式：V=(length × width2)/2

（图片来源网址：https://28223272.s21i.faiusr.com/4/ABUIABAEGAAg4oj5pAYowKrTuwcwsQY40AM.png）

02

尾静脉注射肿瘤转移模型

实验原理：肿瘤细胞具备一定的侵袭转移的能力，把肿瘤细胞注射入裸鼠的血液系统内，能够较好地模拟肿瘤细胞脱离原发灶进入到血液循环中的情况，通过观察远处器官（肺、肝等）内转移灶的形成情况，能够判断肿瘤细胞的转移能力。实验步骤：1.收细胞：与荷瘤相似。2.细胞接种：在超净台上，将裸鼠固定在固鼠器内，压住裸鼠尾巴根部，用酒精棉球擦拭尾巴消毒并扩张血管，用 1ml 注射器吸取单细胞悬液，于尾部中外三分之一处进针，控制注射速度。每只 0.1ml，即 1×106个（不同的细胞接种量可能不同，需要预实验进行摸索）。3.结果观察：接种后，有条件的可通过活体成像系统定期观察细胞的转移情况。于肿瘤细胞接种 4-8周后处死并解剖小鼠，观察肺、肝、淋巴结等脏器有无转移灶，统计各部位的转移灶数目以及大小。对转移灶进行病理取材，置于福尔马林固定后，制成石蜡切片，HE 染色后镜下观察。组织也可根据实验需求进行冻存（液氮）。