无菌试验操作方法及流程与设备的选择
2025-05-28 来源:卓信宏业 点击次数:193无菌试验（Sterility test）是一种微生物检验方法，用以确认规范应为无菌的产品是否受到微生物污染，常见于医药、生物科技、医疗器材制造等领域。
无菌试验的目的无菌试验适用于绝大多数规定为无菌的医药产品，如注射剂、眼药水、固体药物、各式无菌医材等，应用的产品范围非常广泛。
如果这些产品受到微生物污染，在接触人体后可能导致药效降低，甚至引发感染和其他严重并发症。 因此，无菌试验的主要目标是保障规定为无菌的药品、医疗器材在经过无菌制程（Aseptic manufacturing）、*终灭菌（Terminal sterilization）等出厂前作业流程后，不存在活体微生物，使其在临床使用上不会影响药效或是造成感染。
无菌的定义与国际规范
无菌的定义无菌是指样品中不含活体微生物，为保障医药产品安全性的基础要求。 国际上常以「无菌保证程度（Sterility Assurance Level， SAL）」作为灭菌确效的基准，若SAL ≤ 10-6（样品残存的微生物污染机率小于等于百万分之一）即符合无菌要求。
无菌试验的国际规范国际规范如ISO 11737-2、美国药典（USP <71>）、欧洲药典（EP）、日本药典（JP）、中华药典等技术规范中，均明文要求无菌试验的检验环境、样品制备与作流程，确保产品的无菌试验方式符合全球性的统一标准，也为试验结果的可靠性提供保障。
无菌试验怎么做？
常见的无菌试验方法有两种，分别是「微孔滤膜过滤法（Membrane Filtration Method）」和「直接接种法（Direct Inoculation Method）」。 根据国际医药品稽查协约组织（PIC/S）的规范，微孔滤膜过滤法和直接接种法皆需要在B级以上的无菌无尘室内之A级无菌作台进行，作前可依据样品特性选择适合的作方法。
无菌试验方法一：微孔滤膜过滤法微孔滤膜过滤法是目前无菌试验*常用的方法之一，适合液体样品、固体样品、具管线的医疗器材等可冲洗、使用滤膜过滤的样品。
微孔滤膜过滤法的原理是将样品利用孔径小于0.45um的滤膜进行过滤，拦截可能存在的微生物，再将滤膜转移至适当的培养基中进行培养，检测样品中是否有活体微生物的存在。
微孔滤膜过滤法所需设备通常包含真空泵、过滤座与滤膜。 若选用可重复使用之不锈钢过滤杯，除了可以高温高压灭菌 （autoclave） 之外，也可以搭配本生灯进行火焰灭菌，有效节省灭菌时间。
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微孔滤膜过滤法作流程
微孔滤膜过滤法的作流程大致可分为四阶段：样品预处理、样品过滤、滤膜培养和结果判定，以下将依序说明。
1.样品预处理：依据样品的性质，进行微孔滤膜过滤法前需先做不同的预处理，处理方式可参考下表。
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样品种类 |
可过滤之液体 |
溶于肉豆蔻酸异丙酯之软膏及油类 |
抗生素固体 |
标示无菌之 |
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预处理方式 |
可直接过滤，若检品为黏稠液或悬浮液而不易过滤时，可用无菌液稀释后再过滤以增快流速。 |
取适量样品溶于肉豆蔻酸异丙酯，必要时可加热至*44°C，并于溶解后立即过滤。 |
取适量样品溶于无菌溶液后进行过滤。 |
先以无菌溶液冲洗并收集溶液，再以此溶液过滤。 |
2.样品过滤：将预处理好的样品倒入过滤杯内，启动真空泵产生负压，将样品通过滤膜过滤。 若样品数量较多，可采用多连过滤座。
3.滤膜培养：过滤完成后，使用无菌镊子将滤膜转移到适当的培养基中密封，并置于培养箱用适当温度培养14日以上。
4.结果判定：观察培养基是否变得混浊，以判断是否有微生物生长。 若培养基没有变化，表示无微生物生长，判定为符合无菌试验规定; 若培养基变得混浊，则表示样品中有活体微生物，则判定为不符合无菌试验规定。
无菌试验方法二：直接接种法
直接接种法是针对不适合使用滤膜过滤的样品而设计的无菌试验方法，例如无法过滤的溶液、无法溶解的固体或医疗器材等。 直接接种法直接将待测样品置入适当培养基中，藉由观察培养基中微生物的生长状况来判定样品的无菌性。
直接接种法作流程直接接种法的作流程大致可分为三阶段：样品预处理、培养基培养和结果判定，以下将依序说明。
1.样品准备：将样品准备完成后，放入培养基内。
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样品种类 |
固体样品 |
液体样品 |
医疗器材 |
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准备方式 |
使用适当溶剂配置成悬浮液，确保样品能均匀接触培养基。 |
可直接取适量加入培养基中培养。 |
将整个器材或其适当部分直接浸泡于培养基中，并确保所有可能接触微生物的表面均被培养基覆盖。 |
2.培养基培养：将培养基密封放入培养箱，并于适当温度培养14天以上。
3.结果判定：观察培养基是否变得混浊，以判断是否有微生物生长，并记录结果。 若培养基没有变化，表示无微生物生长，判定为符合无菌试验规定; 若培养基变得混浊，则表示样品中有活体微生物，则判定为不符合无菌试验规定。
无菌试验方法比较：微孔滤膜过滤法与直接接种法
微孔滤膜过滤法与直接接种法两种无菌试验方法各有其适用范围与优势，进行无菌试验前应根据样品特性选择合适的方法，以确保试验结果的准确性与可靠性。
| 比较项目 | 微孔滤膜过滤法 | 直接接种法 |
|---|---|---|
| 适用样品 | 液体样品、可溶解样品、具管路的医疗器材 | 不适合滤膜过滤的样品，如高黏度溶液或特殊医疗器材 |
| 作原理 | 使用孔径 ≤0.45 μm 的滤膜拦截微生物，再将滤膜培养 | 将样品直接于培养基培养，观察是否有微生物生长 |
| 所需设备 | 滤膜、真空泵、多连过滤座、不锈钢过滤杯、灭菌设备（火焰灭菌本生灯或高温高压灭菌） | 培养基、无菌容器 |
| 培养天数 | 14天以上 | 14天以上 |
无菌试验方法总结
无菌试验是医药与生技领域不可或缺的重要微生物检测手段，透过微孔滤膜过滤法与直接接种法，能有效检测产品是否受到微生物污染，进而保障药品与医疗器材的稳定与使用的安全性！
延伸阅读：微生物检测与灭菌方式
附录：微孔滤膜过滤法的真空过滤设备选择
利用微孔滤膜过滤法进行无菌试验前，需选择可靠的过滤设备。 真空过滤系统是一种高效且经济的实验室过滤设备，能满足各类样品的过滤需求。
真空过滤系统的组合内含：真空泵（或直接排水式抽水泵）、过滤座（三连座、六连座或十二连座）、滤膜，以及火焰灭菌本生灯，您可以依据实验需求，自由搭配*适合的组合。
洛科真空过滤系统，能降低污染风险并提升实验效率，质量稳定可靠，是无菌试验的*选择！
| 真空过滤设备推荐 | 真空泵 | 多连过滤座 | 旋转多连过滤座 | 火焰灭菌本生灯 |
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