在日常细胞实验中,细胞计数是不可或缺的一步。然而,看似简单的计数,背后却隐藏着不少“雷区”。本期我们整理了细胞计数中常见的问题、原因分析及快速解决方案,助你提升实验效率!
1. 常见的问题、原因分析及快速解决方案
1.1 计数误差大、重复性差
#可能原因
- 混匀不充分,细胞分布不均
- 使用血球计数板时进样不规范
- 细胞团聚,单细胞比例低
#快速解决方案
- 吹打混匀 ≥5次再取样
- 加入DNA酶(如DNase I)或EDTA防止细胞团聚
- 规范操作,避免气泡进入计数板
1.2 死细胞比例过高
#可能原因
- 胰酶消化时间过长,细胞膜受损
- 离心力过大或时间过长导致细胞受损
- 计数染料(如台盼蓝)浓度不合理
#快速解决方案
- 严控消化时间,推荐1–3分钟观察状态
- 软离心(300–400g,3–5分钟)
- 使用新鲜、适当浓度的染料(台盼蓝 0.4%常规推荐1:1稀释)
1.3自动计数系统识别异常
#可能原因
- 背景杂质较多或气泡干扰
- 设置参数不匹配细胞类型
- 图像聚焦不清晰,识别误判
#快速解决方案
- 预过滤细胞悬液(如40 μm滤网)
- 调整识别阈值、大小范围等算法参数
- 确保样本放置平稳、系统自动对焦良好
2. 技术加分项:提升计数质量的小技巧
- 细胞悬液浓度控制在 1×10⁵ – 1×10⁶/mL,利于计数准确
- 定期校准自动计数仪器或更换血球板
- 使用带有自动识别和图像记录功能的系统,如NanoEntek EVE明场系列/ADAM荧光系列细胞计数分析仪,可视化追踪细胞状态
细胞计数是一个“看起来简单、做起来精细”的步骤。掌握关键细节,避免常见误区,能显著提升后续实验的准确性与可重复性。
接下来将介绍一款世界质量认证白金奖自动细胞计数仪——EVE™ PLUS 超快速自动细胞计数仪,助力实验准确高效、减少误差。
3. 设备速览
EVE™ PLUS超快速自动细胞计数仪计数原理主要基于图像分析技术,结合染色和先进的算法来实现对细胞的准确计数。以下是其主要工作原理:
#1 台盼蓝染色
在进行计数之前,细胞样本与台盼蓝染料混合。健康的细胞具有完整的细胞膜,其能够阻止台盼蓝染料进入细胞内部,但当细胞死亡或者细胞膜受损时,台盼蓝则能够进入细胞内从而染色细胞质使其呈现蓝色。
#2 LED光学系统与CMOS检测技术
# LED光学系统
LED光源为细胞提供均匀且稳定的照明环境,有助于提高图像质量和清晰度。
# CMOS检测技术
结合高灵敏度的CMOS传感器,EVE™ PLUS能够捕捉并记录图像。CMOS传感器具有高速、高灵敏度和低噪声等优点,能够确保图像数据的准确性和可靠性。
#3 图像分析
EVE™ PLUS内置的系统算法会对捕捉到的图像进行分析。通过识别图像中的细胞形态和染色特征(如台盼蓝染色的蓝色细胞)区分活细胞和死细胞。
#4 计数与数据输出
根据图像分析的结果,EVE™ PLUS自动计算出样本中的细胞总数、活/死细胞数以及细胞活率,并以图表及图片格式输出。
4. 功能简介
EVE™ PLUS超快速自动细胞计数仪作为一款先进的细胞分析设备,能够准确、简单、快速的提供细胞数量以及细胞存活率。其功能具体如下:
4.1 细胞计数&存活率分析
EVE™ PLUS超快速自动细胞计数仪通过台盼蓝染色,可获得活/死细胞数量以及细胞存活率。
4.2 手动&自动聚焦功能
# 自动聚焦
10秒内获得细胞总数、活/死细胞数、存活率、细胞浓度和细胞直径大小等结果。
# 手动聚焦
1秒内获得细胞总数、活/死细胞数、存活率、细胞浓度和细胞直径大小等结果。
4.3 细胞大小阀门调节
EVE™ PLUS可自定义调整细胞大小阀门。通过调整阀门大小可排除细胞碎片干扰。
4.4 成团细胞单独计数
EVE™ PLUS能够识别和计数成团细胞中的单个细胞,从而进行准确的分析。
4.5 数据存储
细胞计数完成后,结果可自动存储在设备中,避免数据丢失。
4.6 网络连接
EVE™ PLUS提供网卡,可连接WIFI进行邮件发送或者远程操作。