ELISA灵敏度提高或评估的关键点
2025-07-15 来源:本站 点击次数:2
ELISA免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理，对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法，酶联免疫吸附分析（下称ELISA）是免疫分析的一种，分三个部分组成：免疫识别，信号输出和数据处理。
ELISA的灵敏度可以非常高，尤其是通过特定的优化和改进方法。以下是一些提高或评估ELISA灵敏度的关键点：
1. 标准曲线的线性：
2. 检测限（Lower Limit of Detection, LOD）：
LOD是能可靠检测到的最低浓度，对于高灵敏度ELISA试剂盒，如补体C5（C5）ELISA试剂盒，灵敏度可能达到<1.39ng/ml。
3. 回收率：
回收率是评估实验准确性的指标，理想的回收率应在80%到120%之间，这表明检测结果与实际浓度相符。
4. 特异性与交叉反应：
高特异性意味着试剂盒能准确区分目标抗原与其他类似物，避免假阳性结果，这对提高灵敏度至关重要。
5. 重复性（Repeatability）：
板内和板间变异系数（CV）应较低，通常要求板内CV<10%，板间CV<15%，以确保检测结果的可靠性。
6. 优化条件：
包括抗体的选择、孵育时间、洗涤步骤、底物的选择和浓度等，这些都直接影响灵敏度。
7. 免疫PCR（iPCR）：
结合ELISA和PCR技术，免疫PCR能显著提高检测的灵敏度，甚至达到pgfg级别，比传统ELISA提高1000倍。
8. 荧光ELISA（如DELFIA技术）：
使用镧系螯合物标记和时间分辨荧光检测，能显著降低背景信号，提高检测灵敏度。
9. 操作技巧：
标准操作程序（SOP）的严格遵守，包括样本处理、试剂配制和实验条件的控制，是确保高灵敏度的关键。
10. 样本类型：
选择合适的样本类型和处理方法，确保样本中的目标抗原未被破坏或降解，从而提高检测灵敏度。
通过这些方法和考虑因素，ELISA可以实现非常高的灵敏度，适用于多种生物样本的精确检测。
ELISA的灵敏度可以非常高，尤其是通过特定的优化和改进方法。以下是一些提高或评估ELISA灵敏度的关键点：
1. 标准曲线的线性：
- ELISA试剂盒的标准曲线应具有高相关性，通常要求R值大于等于0.9900，理想情况下接近0.999，这表明检测结果与预期浓度高度相关。
- 线性范围内的数据点应能准确反映样品浓度，尤其是在高灵敏度应用中。
2. 检测限（Lower Limit of Detection, LOD）：
LOD是能可靠检测到的最低浓度，对于高灵敏度ELISA试剂盒，如补体C5（C5）ELISA试剂盒，灵敏度可能达到<1.39ng/ml。
3. 回收率：
回收率是评估实验准确性的指标，理想的回收率应在80%到120%之间，这表明检测结果与实际浓度相符。
4. 特异性与交叉反应：
高特异性意味着试剂盒能准确区分目标抗原与其他类似物，避免假阳性结果，这对提高灵敏度至关重要。
5. 重复性（Repeatability）：
板内和板间变异系数（CV）应较低，通常要求板内CV<10%，板间CV<15%，以确保检测结果的可靠性。
6. 优化条件：
包括抗体的选择、孵育时间、洗涤步骤、底物的选择和浓度等，这些都直接影响灵敏度。
7. 免疫PCR（iPCR）：
结合ELISA和PCR技术，免疫PCR能显著提高检测的灵敏度，甚至达到pgfg级别，比传统ELISA提高1000倍。
8. 荧光ELISA（如DELFIA技术）：
使用镧系螯合物标记和时间分辨荧光检测，能显著降低背景信号，提高检测灵敏度。
9. 操作技巧：
标准操作程序（SOP）的严格遵守，包括样本处理、试剂配制和实验条件的控制，是确保高灵敏度的关键。
10. 样本类型：
选择合适的样本类型和处理方法，确保样本中的目标抗原未被破坏或降解，从而提高检测灵敏度。
通过这些方法和考虑因素，ELISA可以实现非常高的灵敏度，适用于多种生物样本的精确检测。
相关文章
更多 >