WB实验中内参抗体选择的原则及技巧
2025-08-08 来源:本站 点击次数:38
内参抗体（Housekeeping Antibodies）是实验中的“标尺”，用于校正样本量差异、评估实验体系稳定性（如Western Blot、免疫组化）。选择合适的内参抗体是确保数据可靠性的关键一步，尤其对高校科研中基因表达、蛋白定量等研究至关重要。
01 样本种属与组织类型
哺乳动物：β-actin、GAPDH、β-tubulin 是百搭选手，适用全细胞 / 胞浆检测。
植物样本：Plant actin 或 Rubisco 更靠谱，避免跨物种干扰。
特殊物种：如酵母、昆虫，建议查文献选保守管家基因（如 Histone H3）。
02 分子量差异
黄金法则：目的蛋白与内参分子量差＞5kDa，避免条带重叠。例：目的蛋白 45kDa，别选 β-actin（42kDa），换 GAPDH（36kDa）或 β-tubulin（50kDa）。
进阶技巧：用预染 Marker 定位，转膜后剪膜分区域检测，省时省力。若目的蛋白与内参分子量分子量接近，可选用4-20%梯度胶，提高分辨率。
03 亚细胞定位
04 实验条件
代谢研究：缺氧、糖尿病模型慎用 GAPDH（其表达受糖酵解影响）。
细胞增殖：c-Jun 表达波动大，换用 PCNA 更稳定。
凋亡实验：Lamin、TBP 易降解，优先选 Histone H3。
单克隆 vs 多克隆
单抗：特异性强，适合跨物种检测。
多抗：亲和力高但可能有非特异结合，适合保守蛋白。
标记类型
直接检测：选 HRP 或荧光标记抗体。
分步检测：用未标记抗体 + 二抗，适合多重检测（需注意宿主种属匹配）。
02 实验条件优化
条带异常
信号弱：提高抗体浓度（如从 1:1000 增至 1:500）或延长曝光时间。
杂带多：降低抗体浓度或改用单抗。
省时技巧
分膜检测：转膜后按分子量剪膜，同时孵育目的蛋白和内参抗体。
一抗复用：用 Strip 缓冲液洗膜后，重新孵育另一抗体（如先测目的蛋白，再测内参）。
A：可能是上样量不均或转膜效率差异。建议：用 BCA 法精确定量，上样前充分涡旋混匀。转膜时用预染 Marker 监控，确保膜与胶紧密贴合。
Q2：如何避免抗体交叉反应？
A：选择不同宿主来源的抗体（如兔抗目的蛋白 + 鼠抗内参），并用对应二抗检测。
Q3: PTM研究如何选内参？
A：检测磷酸化蛋白时，用未修饰的总蛋白（如 p38 总抗体）作为内参，而非通用内参。
“精准实验，从选对抗体开始！”
内参抗体 = 物种匹配 + 分子量差＞5kDa + 亚细胞定位一致 + 实验条件适配
无论是初入实验室的科研新人，还是追求极致精准的资深学者，选择经过严格验证的内参抗体，都是实验成功的基石。
万生昊天内参抗体，专为高校科研场景优化：
高特异性：严格验证，目标条带清晰无杂带。
广适用性：覆盖多种样本（人类、小鼠、大鼠等）及实验需求（WB、IF、IP等）。
严格质控：批间一致性高，稳定性优异，减少实验变量。灵
活选择：提供单克隆/多克隆抗体及不同宿主来源（兔、小鼠等），匹配不同实验体系。
选错内参 = 实验白做？
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一、四大黄金原则
01 样本种属与组织类型
哺乳动物：β-actin、GAPDH、β-tubulin 是百搭选手，适用全细胞 / 胞浆检测。
植物样本：Plant actin 或 Rubisco 更靠谱，避免跨物种干扰。
特殊物种：如酵母、昆虫，建议查文献选保守管家基因（如 Histone H3）。
02 分子量差异
黄金法则：目的蛋白与内参分子量差＞5kDa，避免条带重叠。例：目的蛋白 45kDa，别选 β-actin（42kDa），换 GAPDH（36kDa）或 β-tubulin（50kDa）。
进阶技巧：用预染 Marker 定位，转膜后剪膜分区域检测，省时省力。若目的蛋白与内参分子量分子量接近，可选用4-20%梯度胶，提高分辨率。
03 亚细胞定位
04 实验条件
代谢研究：缺氧、糖尿病模型慎用 GAPDH（其表达受糖酵解影响）。
细胞增殖：c-Jun 表达波动大，换用 PCNA 更稳定。
凋亡实验：Lamin、TBP 易降解，优先选 Histone H3。
二、实战技巧
01 抗体类型与标记选择 单克隆 vs 多克隆
单抗：特异性强，适合跨物种检测。
多抗：亲和力高但可能有非特异结合，适合保守蛋白。
标记类型
直接检测：选 HRP 或荧光标记抗体。
分步检测：用未标记抗体 + 二抗，适合多重检测（需注意宿主种属匹配）。
02 实验条件优化
条带异常
信号弱：提高抗体浓度（如从 1:1000 增至 1:500）或延长曝光时间。
杂带多：降低抗体浓度或改用单抗。
省时技巧
分膜检测：转膜后按分子量剪膜，同时孵育目的蛋白和内参抗体。
一抗复用：用 Strip 缓冲液洗膜后，重新孵育另一抗体（如先测目的蛋白，再测内参）。
三、常见问题Q&A
Q1: 为什么我的内参条带总是不齐？ A：可能是上样量不均或转膜效率差异。建议：用 BCA 法精确定量，上样前充分涡旋混匀。转膜时用预染 Marker 监控，确保膜与胶紧密贴合。
Q2：如何避免抗体交叉反应？
A：选择不同宿主来源的抗体（如兔抗目的蛋白 + 鼠抗内参），并用对应二抗检测。
Q3: PTM研究如何选内参？
A：检测磷酸化蛋白时，用未修饰的总蛋白（如 p38 总抗体）作为内参，而非通用内参。
“精准实验，从选对抗体开始！”
内参抗体 = 物种匹配 + 分子量差＞5kDa + 亚细胞定位一致 + 实验条件适配
无论是初入实验室的科研新人，还是追求极致精准的资深学者，选择经过严格验证的内参抗体，都是实验成功的基石。
万生昊天内参抗体，专为高校科研场景优化：
高特异性：严格验证，目标条带清晰无杂带。
广适用性：覆盖多种样本（人类、小鼠、大鼠等）及实验需求（WB、IF、IP等）。
严格质控：批间一致性高，稳定性优异，减少实验变量。灵
活选择：提供单克隆/多克隆抗体及不同宿主来源（兔、小鼠等），匹配不同实验体系。
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