方案摘要：管碟法是抗生素效价测定的 “金标准” 之一，其核心在于通过 “平行线原理” 实现标准品与供试品的精准对比，虽操作繁琐，但能直接反映抗生素的生物活性，在药品质量控制中具有不可替代的地位。为提升检测效率，本方案使用了自动菌落计数仪，设定好程序之后即可一键判读出抑菌圈的直径，有效减少人工误差，提高检测效率。
 
方案详情：

• 实验原理

管碟法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
二、‌实验准备
1、设配和材料
① 自动菌落计数仪；
② 平底双碟；
③ 不锈钢小管。
 
2、试剂和材料
① 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液；
② 短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）悬液；
③ 金黄色葡萄球菌（Szaphylococcus aureus）悬液；
④ 藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液；
⑤ 大肠埃希菌（Escherichia coli）悬液；
⑥ 啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液；
⑦ 肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）悬液；
⑧ 支气管炎博德特菌（Bordetella bronchiseptica）悬液。
⑨ 营养琼脂。
 
三、实验步骤
1、标准品溶液的制备以及标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。临用时照表1的规定进行稀释。
2、供试品溶液的制备：精密称（或量）取供试品适量，用各品种项下规定的溶剂溶解后，再按估计效价或标示量照表1的规定稀释至与标准品相当的浓度。
 
 
　注：①    两性霉素B双碟的制备，用菌层15ml代替两层。
　　  ② 乙酰螺旋霉素，抗II检定培养基制备时，调节pH值使灭菌后为8.0～8.2。
　　  ③ 含3%氯化钠。
　　  ④ 加0.3%葡萄糖。
 
3、标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。
 
4、双碟的制备： 取直径约90mm，高16～17mm的平底双碟，分别注入加热融化的培养基（表1）20ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台面上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热融化后，放冷至48～50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液适量(能得清晰的抑菌圈为度。三剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15～18mm)，摇匀，在每1双碟中分别加入5mL，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置在水平台上冷却后，在每1双碟中以等距离均匀安置6个不锈钢小管(内径为6.0mm±0.1mm，高为10.0mm±0.1mm，外径为7.8mm±0.1mm)，用陶瓦圆盖覆盖备用。

5、取照上述方法制备的双碟不得少于6个，在每1双碟中间隔的3个不锈钢小管中分别滴装高浓度(S₃)、中浓度(S₂)及低浓度(S₁)的标准品溶液，其余3个小管中分别滴装相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为1∶0.8。
四、结果判定
将在规定条件下培养后的双碟，放入菌落计数仪内，启动抑菌圈测定软件，一键即可测量出各个抑菌圈直径(或面积)，测量结果可以直接在屏幕显示或传输到EXCEL文件。