细胞来源及优势

1973年，HEK293细胞是从人类胚胎肾脏中分离的上皮形态细胞、后转染了5型腺病毒（Ad5）DNA获得的永生化细胞。自HEK293建系以来，衍生了很多细胞系，主要包括293T、293T/17、293F、293A、293E、293FT、AAV-293、293S等。293细胞系的优势有很多：容易转染，能够高效表达目的基因；作为一种哺乳动物细胞，能够完成复杂的翻译后修饰，以确保蛋白功能的正确，并且更接近天然人体蛋白，可以降低免疫原性；分泌表达能力强、生长快速，有些细胞系适应无血清培养基悬浮培养，适合大规模生产。293细胞常常用于生产重组蛋白、疫苗、慢病毒或腺相关病毒载体等。

图1  293细胞系衍生示意图

常用的293细胞系

HEK293：是最原始的293细胞，是由原代人胚胎肾细胞转染Ad5 DNA获得的永生化细胞，Ad5 DNA序列整合到了19号染色体。该细胞是目前人类腺病毒载体扩增的合适宿主。

293T：是在HEK293基础上，稳转SV40 T-抗原基因后产生的高转染效率的衍生株，携带SV40复制序列，被广泛用于逆转录病毒生产、基因表达和蛋白表达。

293T/17：是293T的衍生株。克隆293T细胞，用pBND和pZAP载体检测，获得了能够产生高滴度感染性逆转录病毒293T/17的细胞系。

293A：是HEK 293的亚克隆，该细胞包含稳定整合的 E1 基因拷贝，能够提供生成重组腺病毒所需的 E1 蛋白（E1a 和 E1b）。该细胞具有良好的贴壁能力，常用来腺病毒生产、扩增和滴定。

293F：来源于HEK293（F是Fast-growth的首字母），是一种快速生长、转染效率高的克隆株。该细胞适合用于瞬时转染，蛋白表达量较高，还能够在化学成分限定的无血清培养基中悬浮培养，适合工艺放大生产。

293FT：来源于用SV40大T抗原转化的293F，是一种快速生长、转染效率高的克隆分离株。该细胞可稳定表达SV40大T抗原，并且促进最适病毒产物的产生。293FT细胞能制造高滴度的慢病毒，是制备高滴度慢病毒的最佳宿主。

293E：是由HEK293衍生而来的一株亚克隆。该细胞经过工程改造后插入EBNA-1基因（Epstein-Barr 病毒核抗原-1），可稳定表达EBNA-1蛋白。EBNA-1蛋白能够与携带EB病毒复制起点（oriP）的重组表达质粒相互作用，促进质粒在细胞内以游离型的方式进行复制，并实现重组蛋白的高效表达，在重组蛋白生产和基因功能研究中应用广泛。

AAV-293：源自HEK293，AAV-293细胞反式表达腺病毒E1基因，当共转染三个AAV助质粒(一个含ITR的质粒，pAAV-RC, 和E1缺失助质粒)时，可以产生有感染力的腺病毒-相关病毒颗粒。

以上是常用的293细胞系的简单介绍，希望对大家如何挑选和使用293系列细胞有所帮助。

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