微生物限度检查薄膜过滤法常规操作流程及注意事项
2025-10-22 来源:洛科仪器股份有限公司大陆办事处 点击次数:58
一、适用范围
本规程适用于纯化水、注射用水等水系统及非无菌制剂的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌的计数检测。
二、操作步骤
1. 实验准备
环境要求：在洁净度10000级下的局部100级单向流空气区域操作。
器材准备：
0.45μm孔径灭菌滤膜（直径47mm）
营养琼脂、R2A琼脂等培养基（提前灭菌）
无菌镊子、滤杯、真空泵及缓冲液（pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）
滤膜处理：用纯化水浸泡滤膜3-5分钟，检查完整性后备用。 2. 过滤操作
润膜：用缓冲液湿润滤膜，抽滤排除多余液体。
样品过滤：
取1-10ml供试液（必要时稀释）加入滤杯。
启动真空泵，缓慢抽滤至滤膜干燥。
冲洗：用100ml缓冲液冲洗滤膜，去除残留抑制物。
3. 滤膜培养
贴膜：用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于培养基平板，避免气泡。
培养条件：
细菌：30-35℃培养48-72小时。
霉菌/酵母菌：23-28℃培养5-7天。
4. 结果观察
计数：使用菌落计数器记录菌落数，排除异常生长平板。
报告：以CFU/ml为单位报告结果，若无菌落生长则报告<1。
三、关键注意事项
无菌操作：全程在生物安全柜或洁净环境中进行，避免污染。
滤膜完整性：使用前检查滤膜无破损，过滤后确认无泄漏。
阴性对照：设置缓冲液阴性对照，确保无假阳性结果。
样品处理：
高菌量样品需适当稀释。
油性样品需先干燥滤膜。
设备维护：
定期检查真空泵密封性。
不锈钢滤杯使用前需更换或重新灭菌。
四、异常处理
结果超标：复查取样过程及系统清洁度，检查滤膜完整性。
过滤失败：检查管路连接、滤杯密封性及滤膜孔径。
五、记录与验证
记录过滤量、培养温度、菌落形态等关键数据。
定期进行方法验证，确保检测灵敏度符合要求。
本规程适用于纯化水、注射用水等水系统及非无菌制剂的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌的计数检测。
二、操作步骤
1. 实验准备
环境要求：在洁净度10000级下的局部100级单向流空气区域操作。
器材准备：
0.45μm孔径灭菌滤膜（直径47mm）
营养琼脂、R2A琼脂等培养基（提前灭菌）
无菌镊子、滤杯、真空泵及缓冲液（pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）
滤膜处理：用纯化水浸泡滤膜3-5分钟，检查完整性后备用。 2. 过滤操作
润膜：用缓冲液湿润滤膜，抽滤排除多余液体。
样品过滤：
取1-10ml供试液（必要时稀释）加入滤杯。
启动真空泵，缓慢抽滤至滤膜干燥。
冲洗：用100ml缓冲液冲洗滤膜，去除残留抑制物。
3. 滤膜培养
贴膜：用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于培养基平板，避免气泡。
培养条件：
细菌：30-35℃培养48-72小时。
霉菌/酵母菌：23-28℃培养5-7天。
4. 结果观察
计数：使用菌落计数器记录菌落数，排除异常生长平板。
报告：以CFU/ml为单位报告结果，若无菌落生长则报告<1。
无菌操作：全程在生物安全柜或洁净环境中进行，避免污染。
滤膜完整性：使用前检查滤膜无破损，过滤后确认无泄漏。
阴性对照：设置缓冲液阴性对照，确保无假阳性结果。
样品处理：
高菌量样品需适当稀释。
油性样品需先干燥滤膜。
设备维护：
定期检查真空泵密封性。
不锈钢滤杯使用前需更换或重新灭菌。
四、异常处理
结果超标：复查取样过程及系统清洁度，检查滤膜完整性。
过滤失败：检查管路连接、滤杯密封性及滤膜孔径。
五、记录与验证
记录过滤量、培养温度、菌落形态等关键数据。
定期进行方法验证，确保检测灵敏度符合要求。
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