预防ELISA实验异常的方法总结
2025-10-23 来源:本站 点击次数:11
以下是预防ELISA实验异常的关键方法，综合了样本处理、试剂选择、操作规范及质量控制等多方面措施：
一、样本处理与保存
避免溶血与污染：血清/血浆样本需防止溶血（血红蛋白干扰HRP显色）及细菌污染（内源性酶干扰）。
分装冻存：长期保存样本应分装后置于-70℃，避免反复冻融导致蛋白降解。
稀释样本：高浓度样本需稀释至标准曲线范围内，避免“钩状效应”。
二、试剂与操作优化
试剂平衡：使用前将试剂盒室温平衡20分钟，确保孵育温度稳定。
移液精度：校正移液器，避免微量误差（如<1μL时误差率可达±25%）。
洗涤规范：洗板机需检查喷孔通畅，推荐洗涤5-6次，每次静置30秒。
三、温育与信号控制
温度一致性：37℃±0.5℃温育，避免温度波动影响抗原抗体结合。
显色时间：底物反应需现配现用，显色时间严格控制在5-15分钟内。
信号放大：采用生物素-链霉亲和素系统提升灵敏度。
四、质量控制与对照设置
对照实验：设置阴性对照（空白孔）、阳性对照（标准品）及回收率试验。
重复检测：同一样本设2-3个复孔，批内变异系数（CV）应<10%。
仪器校准：定期校准酶标仪波长（如450nm）和移液器。
五、常见问题规避
假阳性：避免抗凝不全（如肝素血浆）或样本浑浊，需离心澄清。
假阴性：检查试剂有效期，避免反复冻融导致抗体效价下降。
通过以上措施可显著降低ELISA实验异常风险，确保结果准确性和重复性。
一、样本处理与保存
避免溶血与污染：血清/血浆样本需防止溶血（血红蛋白干扰HRP显色）及细菌污染（内源性酶干扰）。
分装冻存：长期保存样本应分装后置于-70℃，避免反复冻融导致蛋白降解。
稀释样本：高浓度样本需稀释至标准曲线范围内，避免“钩状效应”。
二、试剂与操作优化
试剂平衡：使用前将试剂盒室温平衡20分钟，确保孵育温度稳定。
移液精度：校正移液器，避免微量误差（如<1μL时误差率可达±25%）。
洗涤规范：洗板机需检查喷孔通畅，推荐洗涤5-6次，每次静置30秒。
三、温育与信号控制
温度一致性：37℃±0.5℃温育，避免温度波动影响抗原抗体结合。
显色时间：底物反应需现配现用，显色时间严格控制在5-15分钟内。
信号放大：采用生物素-链霉亲和素系统提升灵敏度。
四、质量控制与对照设置
对照实验：设置阴性对照（空白孔）、阳性对照（标准品）及回收率试验。
重复检测：同一样本设2-3个复孔，批内变异系数（CV）应<10%。
仪器校准：定期校准酶标仪波长（如450nm）和移液器。
五、常见问题规避
假阳性：避免抗凝不全（如肝素血浆）或样本浑浊，需离心澄清。
假阴性：检查试剂有效期，避免反复冻融导致抗体效价下降。
通过以上措施可显著降低ELISA实验异常风险，确保结果准确性和重复性。
相关文章
更多 >