判断大鼠ELISA试剂盒灵敏度是否达标的方法
2025-10-30 来源:本站 点击次数:28
ELISA试剂盒的灵敏度是指其能够稳定检出目标物质的最低浓度，通常在说明书中有明确的数值说明。对于大鼠样本（如血清、血浆、细胞上清等）的检测，灵敏度的判定尤为重要，以避免因低浓度信号不明显导致假阴性结果。
判断大鼠ELISA试剂盒的灵敏度是否达标需通过以下关键指标和实验验证：
一、最低检测限（LLOD）
定义：空白孔OD均值+2倍标准差对应的浓度，通常由试剂盒说明书标注（如0.2 pg/mL）。
验证方法：通过标准曲线确定，要求R²≥0.99，且标曲最低浓度点（如7.81 pg/mL）的变异系数（CV）≤20%。
二、功能灵敏度（FS）
标准：批内CV≤10%，批间CV≤15%。若批间CV>15%，则灵敏度可能不达标。
三、回收率与稀释线性
回收率：加标样本的回收率应在84%-110%之间，偏离此范围表明灵敏度不稳定。
稀释线性：样本稀释后检测值应与理论值偏差<20%。
四、交叉反应验证
检测类似蛋白的交叉反应率（如大鼠IL-6试剂盒需验证IL-1β干扰），要求<10%。
五、实际样本验证
若样本中目标蛋白浓度接近LLOD（如7.81 pg/mL），需重复检测确认结果重现性。
六、注意事项：
灵敏度需与样本预期浓度匹配，低浓度样本应选择灵敏度至少低于预期浓度1个数量级的试剂盒。
不同批次试剂需重新验证灵敏度，避免批间差异。
判断大鼠ELISA试剂盒的灵敏度是否达标需通过以下关键指标和实验验证：
一、最低检测限（LLOD）
定义：空白孔OD均值+2倍标准差对应的浓度，通常由试剂盒说明书标注（如0.2 pg/mL）。
验证方法：通过标准曲线确定，要求R²≥0.99，且标曲最低浓度点（如7.81 pg/mL）的变异系数（CV）≤20%。
二、功能灵敏度（FS）
标准：批内CV≤10%，批间CV≤15%。若批间CV>15%，则灵敏度可能不达标。
三、回收率与稀释线性
回收率：加标样本的回收率应在84%-110%之间，偏离此范围表明灵敏度不稳定。
稀释线性：样本稀释后检测值应与理论值偏差<20%。
四、交叉反应验证
检测类似蛋白的交叉反应率（如大鼠IL-6试剂盒需验证IL-1β干扰），要求<10%。
五、实际样本验证
若样本中目标蛋白浓度接近LLOD（如7.81 pg/mL），需重复检测确认结果重现性。
六、注意事项：
灵敏度需与样本预期浓度匹配，低浓度样本应选择灵敏度至少低于预期浓度1个数量级的试剂盒。
不同批次试剂需重新验证灵敏度，避免批间差异。
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