减少猪ELISA试剂盒非特异性结合的方法
2025-11-06 来源:本站 点击次数:25
要减少猪ELISA试剂盒的非特异性结合，可采取以下关键措施：
1、优化封闭步骤：使用5%脱脂奶粉或1% BSA（牛血清白蛋白）在37℃下封闭1小时，有效封闭未结合位点，减少杂蛋白吸附。
2、严格洗涤程序：采用含0.05% Tween-20的PBS洗涤液，充分去除未结合物质，但避免过度洗涤（>5次）导致目标复合物被洗脱。
3、选择高特异性抗体：优先使用单克隆抗体，因其仅识别特定表位，可显著降低交叉反应风险。
4、控制包被条件：4℃过夜包被（16-18小时）比37℃快速包被（1-2小时）更稳定，且需根据抗原特性选择合适缓冲液（如pH 9.6碳酸盐缓冲液或pH 7.4 PBS）。
5、优化洗涤液组成：调整缓冲液、洗涤剂（如Tween-20）和防腐剂比例，平衡去除非特异性结合与保留特异性信号的需求。
核心建议：通过封闭、洗涤、抗体选择及包被条件的系统优化，可有效降低非特异性结合，提升检测准确性。
1、优化封闭步骤：使用5%脱脂奶粉或1% BSA（牛血清白蛋白）在37℃下封闭1小时，有效封闭未结合位点，减少杂蛋白吸附。
2、严格洗涤程序：采用含0.05% Tween-20的PBS洗涤液，充分去除未结合物质，但避免过度洗涤（>5次）导致目标复合物被洗脱。
3、选择高特异性抗体：优先使用单克隆抗体，因其仅识别特定表位，可显著降低交叉反应风险。
4、控制包被条件：4℃过夜包被（16-18小时）比37℃快速包被（1-2小时）更稳定，且需根据抗原特性选择合适缓冲液（如pH 9.6碳酸盐缓冲液或pH 7.4 PBS）。
5、优化洗涤液组成：调整缓冲液、洗涤剂（如Tween-20）和防腐剂比例，平衡去除非特异性结合与保留特异性信号的需求。
核心建议：通过封闭、洗涤、抗体选择及包被条件的系统优化，可有效降低非特异性结合，提升检测准确性。
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