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D-荧光素钾盐的核心作用及在生物发光实验等中的应用

2025-11-06     来源:本站     点击次数:44

如果你从事生物实验,尤其是涉及活体成像、基因表达检测的研究,那大概率会用到荧光素酶相关的实验体系 —— 而爱必信(Absin)品牌的 D - 荧光素钾盐,就是这个体系里常用的关键底物,今天就来简单介绍下这款实用的实验产品。

一、产品基本信息
爱必信 D - 荧光素钾盐(货号:abs42075819-1g)有明确的化学特性和稳定的品质:
分子式为 C₁₁H₇N₂O₃S₂・K,分子量 318.41,CAS 号 115144-35-9;
纯度>98%,外观是淡黄色粉末,易溶于水(溶解度≥30mg/mL),能轻松配制成实验所需的溶液;
运输需在 2~8℃条件下,固体状态下 - 20℃避光保存有效期 1 年,配成溶液后 - 80℃保存有效期 3 个月,注意避免反复冻融。

二、它为什么能发光?
D - 荧光素钾盐的核心作用,是作为荧光素酶(Luciferase)的底物产生生物发光,具体过程不复杂:
在有氧环境下,还有 Mg²⁺和 ATP(三磷酸腺苷)的参与,D - 荧光素钾盐会在荧光素酶的催化下发生反应 —— 先生成荧光素 - AMP 复合体并释放焦磷酸,接着这个复合体再和氧气反应生成氧化荧光素,同时释放 CO₂和 H₂O。
而在这个过程中,处于 “激发态” 的氧化荧光素会回到稳定的 “基态”,这个过程就会发出 540-600nm 的蓝绿光。
利用这个特性,我们可以做很多研究:比如把带荧光素酶基因(Luc)的质粒转进细胞,再把细胞导入实验动物(像小鼠)体内,之后注入 D - 荧光素钾盐,通过生物发光成像技术(BLI)观察光的强度,就能实时监测疾病发展、药物治疗效果;也能通过 ATP 对这个反应的影响,判断实验体系里的能量或生命体征情况。

三、怎么用?
D - 荧光素钾盐主要用于 “体外生物发光检测” 和 “活体成像分析”,两种场景的操作步骤都比较清晰:
1. 体外生物发光检测(比如细胞实验)
第一步配储备液:用无菌纯净水溶解,配成 30mg/mL 的储备液(浓度是 100-200×),摇匀就能用;用不完的储备液分装后,-20℃避光保存,别反复冻融,不然会影响活性。
第二步配工作液:把组织培养基在 37℃恒温下预热 10-20 分钟,再用预热好的培养基把储备液稀释到 0.15-0.3mg/mL(具体浓度可根据实验调整),得到工作液。
第三步处理细胞:去掉细胞原来的培养基,加入配好的工作液,在 37℃下孵育 5-10 分钟,之后就能进行图像分析了。
2. 活体成像分析(比如动物实验)
第一步配储备液:用不含钙、镁离子的无菌 DPBS 缓冲液溶解,配成 15mg/mL 的储备液,摇匀后用 0.2μm 水系滤器过滤除菌;用不完的同样分装后 - 20℃避光保存,避免反复冻融。
第二步注射:给实验动物(如小鼠)做腹腔注射,注射剂量按 “150mg/kg 体重” 来算(比如 20g 的小鼠,就注射 0.2mL 储备液)。
第三步成像:注射后等 10-15 分钟,待体内光信号达到最强且稳定的状态,再进行成像分析。

四、能用来做什么?
这款产品的应用范围很广,在生物技术和相关领域都很实用:
首先是活体成像研究:这是它最主要的用途之一,比如监测肿瘤生长、炎症发展,或者评估药物对疾病的治疗效果,能实时看到体内的变化。
其次是基因表达检测:如果要检测和特定启动子相连的荧光素酶基因的表达情况,用它作为底物,通过发光强度就能判断基因的表达水平。
还有免疫测定:荧光素酶常和抗体结合做标记,而 D - 荧光素钾盐就是这个标记的检测底物 —— 它的优势在于,哺乳动物组织里的内源性荧光素酶活性很低,而且检测灵敏度高。
最后是卫生监测:比如食品加工厂,用它和荧光素酶的反应体系能检测 ATP(所有生物体都含有 ATP),通过是否发光、发光强度,判断设备表面或产品是否有污染,保障食品卫生。

五、实验注意事项
用的时候注意这几点,能让实验更顺利、结果更准确:
注射方式、动物类型、动物体重都会影响发光信号,建议每次实验都做 “荧光素酶动力学曲线”,找到最佳的检测时间和信号稳定期。
如果要检测 ATP,一定要避免外源 ATP 污染:操作时戴手套,用不含 ATP 的实验耗材,溶解荧光素时用不含 ATP 的无菌水。
全程要避光操作、避光保存:储备液过滤除菌后分装到 - 80℃冻存,只能冻融 1 次;有条件的话,给储备液充氮气或氩气,能防止氧化,保存时间能长达 1 年。
溶解时别用含钙、镁离子的溶液:一定要用不含钙、镁的 DPBS,因为钙、镁可能会抑制荧光素酶的活性,还可能影响荧光素的氧化,进而影响检测结果。
操作安全:记得穿实验服、戴一次性手套,保护自己的安全和健康。
爱必信 D - 荧光素钾盐凭借 “光易透过组织、体内代谢慢、特异性好” 的优势,成为了很多活体成像实验的首选底物,如果你有相关实验需求,可以通过优宁维的链接了解更多产品详情或购买:https://www.univ-bio.com/d-luciferin-potassium-salt/abs42075819-1g.html
名称 货号 规格
百日咳毒素溶液 abs42024902-0.5mL 0.5mL
D-荧光素钾盐 abs42075819-1g 1g
Protein A/G PLUS-Agarose sc-2003 2ml
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