PCR抑制剂去除方法总结
2025-12-10 来源:本站 点击次数:50
PCR抑制剂广泛存在于血液、土壤、植物、粪便等复杂样本中，如腐殖酸、血红素、多糖、酚类物质等。它们会干扰DNA聚合酶活性或阻碍引物结合，导致扩增失败或假阴性结果。因此，在进行PCR前有效去除或中和这些抑制物至关重要。
主要去除方法分类
以下是根据作用机制和操作方式整理的三大类 PCR抑制剂去除策略：
建议
对于常规实验，建议优先采用核酸纯化+商业清除剂辅助的方式确保结果可靠性；若追求速度与便捷，可选用抗抑制反应体系进行直接扩增，尤其适用于粪便、痰液等富含抑制物的临床样本。同时注意避免引入新的污染源，如未彻底清洗的耗材。
主要去除方法分类
以下是根据作用机制和操作方式整理的三大类 PCR抑制剂去除策略：
| 方法类别 | 核心原理 | 常用技术/产品 | 适用场景 | 优势 | 局限性 |
| 样本纯化处理 | 从样品中物理或化学去除抑制物 | CTAB法、酚-氯仿抽提、硅胶柱纯化（如QIAamp试剂盒）、磁珠法、电膜萃取（EME） | 植物、粪便、土壤、血液等富含杂质样本 | 去除彻底，适用于高浓度抑制物 | 步骤繁琐，可能损失DNA，耗时较长 |
| 直接添加清除剂 | 在PCR体系中加入可中和或屏蔽抑制物的试剂 | PCR抑制物清除剂（如泽叶生物、华越洋、天恩泽产品），BSA（牛血清蛋白） | 已提取但含残留抑制物的DNA样本 | 操作简便，一步加入即可 | 效果依赖抑制物类型和浓度，可能影响反应平衡 |
| 抗抑制型反应体系 | 使用耐受性强的酶或优化配方 | 含Betaine、DMSO的增强剂，Specimen-specific™预混液，改良Taq酶 | 粗裂解物、免提取样本（如唾液、尿液） | 可实现免核酸提取直扩，适合POCT应用 | 成本较高，需匹配特定样本类型 |
建议
对于常规实验，建议优先采用核酸纯化+商业清除剂辅助的方式确保结果可靠性；若追求速度与便捷，可选用抗抑制反应体系进行直接扩增，尤其适用于粪便、痰液等富含抑制物的临床样本。同时注意避免引入新的污染源，如未彻底清洗的耗材。
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