文章来源公众号：CGT未来            作者：细胞也迷茫

嵌合抗原受体（Chimeric Antigen Receptor, CAR）T细胞疗法在B细胞恶性肿瘤（如B细胞淋巴瘤和白血病）中取得了显著成功，主要得益于CAR-T细胞在外围血液中的强劲扩增和长期持久性。这种扩增与无进展生存期和总生存期密切相关。然而，将这一成功扩展到实体瘤面临重大挑战：实体瘤靶抗原通常不表达于外围组织，导致CAR-T细胞无法在外围激活和扩增，从而限制其向肿瘤部位的有效迁移。此外，实体瘤的免疫抑制性微环境、异质性和低抗原表达进一步加剧了问题。高剂量CAR-T细胞输注可能引发“首过效应”（first-pass effect），即CAR-T细胞在肺部首次通过时检测到健康组织上的低水平抗原，导致靶向外毒性（on-target, off-tumor toxicity）。

最近，Carl H. June在《PNAS》发文“Dual- targeted ping- pong CAR T cells: Leveraging peripheral expansion to improve solid tumor immunotherapy”，利用内源性非必需抗原CD19（表达于B细胞）来驱动扩增。本研究将CD19和实体瘤靶向CAR整合到一个T细胞中，使用独特的信号域（CD19/28ζ和肿瘤4-1BBζ）来模拟T细胞激活的时序：外围通过B细胞诱导CD28ζ信号，肿瘤中诱导4-1BBζ信号。这种“乒乓”（ping-pong）振荡机制可避免下游功能障碍，促进休息-恢复周期。优化后，双重CAR设计（CD19/28ζ-M5BBζ）降低了非特异性扩增和对低抗原健康组织的反应性，同时保持了对高抗原肿瘤的细胞毒性。该策略旨在将血液肿瘤的长期疗效扩展到实体瘤，而无需淋巴耗竭。

双靶向CAR-T细胞在外周通过外周血、脾脏和骨髓的迁移过程

主要结果
①在没有进行淋巴细胞清除的情况下，双靶点CAR-T细胞在外周血中显著扩增，且扩增水平高于单靶点CAR-T细胞（A03BBζ或CD19/28ζ）。

②在“热”肿瘤模型中，双靶点CAR-T细胞在PDAC 2838c3模型中表现出显著的肿瘤控制能力，与单靶点CAR-T细胞（A03BBζ）相比，能够显著降低肿瘤体积，延长小鼠生存期，表现出更高的治疗效果。在“冷”肿瘤模型中，单独使用双靶点CAR-T细胞的抗肿瘤效果有限，但与αPDL-1或trCD19-AdV联合使用时，疗效显著增强，尤其是trCD19-AdV的联合使用显著延长了生存期。

③双靶点CAR-T细胞在脾脏和骨髓中具有强大的扩增能力和持久的B细胞清除效果，同时其活化状态能够得到有效调控，避免功能失调。此外，双靶点CAR-T细胞还能够激活内源性T细胞，进一步增强抗肿瘤免疫反应。

④双靶点CAR-T细胞能够有效克服实体瘤治疗中的关键障碍，即肿瘤浸润不足和功能失调问题。双靶点CAR-T细胞不仅能够在肿瘤微环境中显著扩增和浸润，还能保持活化状态和效应功能，最终实现更强的肿瘤清除效果。

⑤双靶点CAR-T细胞通过清除CD19+ B细胞实现了抗原依赖的动态扩增。当内源性B细胞恢复时，双靶点CAR-T细胞能够再次扩增，表现出“乒乓效应”。补充外源性B细胞能够显著提高双靶点CAR-T细胞的抗肿瘤效果，表现为肿瘤体积显著缩小和完全消退的比例增加。

题外延伸
斯丹赛生物（Innovative Cellular Therapeutics, ICT）的CoupledCAR®平台与本文的核心设计理念和技术机制上高度相似。1）使用双重CAR方法来刺激免疫系统，以促进CAR-T细胞扩增；2）增强了与肿瘤细胞迁移相关的基因表达，改善了CAR-T细胞向肿瘤迁移和浸润受到抑制的困境；3）增强了CAR-T细胞在肿瘤微环境中的杀伤能力，进入实体瘤后，CoupledCAR®可刺激机体产生、募集更多的免疫细胞，产生更有效和持久的反应。

2025年ASCO年会，斯丹赛生物报告GCC19CART产品的临床试验的初步结果，试验采用单次输注GCC19CART，剂量为1×10⁶ cells/kg（DL1组，n=4）和2×10⁶ cells/kg（DL2组，n=5），患者均为标准治疗失败的重度预处理人群。

主要疗效：客观缓解率（ORR）整体达56%（5/9），其中DL1组25%，DL2组高达80%。疾病控制率（DCR）整体78%，DL2组80%。部分患者出现病理完全缓解（pCR）或完全代谢缓解（CMR），显示出剂量依赖性临床活性与持久性。

安全性：总体耐受性可接受，主要不良事件为细胞因子释放综合征（CRS）和GCC靶向相关的腹泻/结肠炎（可管理）。DL2组1例剂量限制性毒性（grade 3腹泻、grade 4肠炎、grade 5败血症），死亡原因系真菌性败血症（输注后48天）。

整体来说，GCC19CART在难治性mCRC中展现出显著临床活性和可接受安全性，是实体瘤CAR-T领域的积极进展。​