细 胞 基 本 信 息

• 细胞名称： MM.1S(人多发性骨髓瘤细胞)
• 细胞别称： MM.1S；MM1-S；MM-1S；MM1S
• 细胞货号： SNL-553
• 生长特性： 半贴壁
• 培养条件： 1640+15% FBS+1% P/S
• 培养环境: 37℃；5% CO2；饱和湿度
• 细胞简介: MM.1S细胞源于患有多发性骨髓瘤的黑人女性患者，CD25+, CD38+, CD52+, CD59+，表达糖皮质激素受体（GR），分泌IgGλ轻链，对地塞米松敏感。

▲细胞正常生长形态照片

01、MM.1S细胞培养注意事项
 

• 半换液法：

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）
2. 将培养瓶竖立静置一段时间，待细胞沉底；（肉眼观察细胞沉底情况）
3. 吸头紧贴液面，小心吸出一半的培养基，转移到离心管；
4. 900-1000rpm 3min离心，离心管里若有细胞，则用新鲜培养基重悬后放回原瓶；
5.原瓶补充一半的新鲜培养基。
tips：建议半换液2-3次后进行离心换液。
 

• 离心换液法：

1. 备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）
2. 将所有细胞悬液转移至离心管中；
3. 900-1000rpm，3min离心；
4. 弃上清，加5mL PBS轻轻重悬细胞进行润洗，再900-1000rpm，3min离心；
tips：此处PBS润洗是为了去除细胞碎片，平时培养若细胞碎片不多可以忽略此步骤。
5. 培养瓶中加入适量新鲜培养基；
6.离心完成后弃上清，加适量新鲜培养基轻轻重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种回培养瓶中，混匀细胞，放入培养箱中继续培养。
 
03、MM.1S细胞传代方法
 
1. 备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）
2. 用移液器吸取培养瓶内细胞悬液转移至离心管中；使用1ml枪头轻吹贴壁细胞，如果不好吹下来，可以使用胰酶消化下来，也转移至离心管中；
3. 900-1000rpm，3min离心收集细胞；
4. 在培养瓶中加入适量新鲜培养基；（T25推荐10mL，T75推荐20mL）
5. 离心完成后，弃离心管内上清，然后加入适量新鲜培养基，轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养瓶中，轻轻混匀后将细胞放入培养箱中继续培养。
tips：注意控制吹打力度尽可能轻柔和离心转速以及时间不要过高，避免细胞受机械损伤。
传代比例推荐1：2
 
04、MM.1S细胞冻存方法
 
1.准备所需的培养基、PBS、血清、DMSO、离心管以及无菌枪头等；（试剂需提前预热）
tips：若冻存前培养基已经变黄，先换液静置培养4h左右，待细胞活力稳定后再进行冻存。
2. 根据收集到细胞量，配制相应量的冻存液，并准备相应数量的冻存管，在冻存管上标志细胞名称，代次，冻存时间等信息。推荐冻存液配方：92%FBS+8%DMSO；冻存密度300万细胞/mL/管。
tips：冻存密度过低将导致复苏后状态不佳。
3. 将细胞悬液转移至离心管中1000rpm，3min离心收集细胞；
4. 离心完成后弃上清，加入相应量的配置好的冻存液轻轻重悬混匀细胞，将细胞悬液分装至冻存管中。注意吹打力度，不要产生过多气泡；
tips：加入冻存液混匀细胞后及时分装并将细胞降温冻存，以减少DMSO对细胞的毒性。
5. 将细胞放置程序降温冻存盒中，再将冻存盒转移至-80℃冰箱进行降温冻存。
6. 次日（16h-24h后）复苏一管检查冻存效果，确认没问题后及时将冻存细胞放置液氮中保存，细胞在-80℃冰箱放置时间不要超过3天。
 
05、MM.1S细胞复苏方法
 
1. 提前将水浴锅预热至37℃，培养基复温至室温或37℃，离心机设置好转速；
2. 将冻存细胞从液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速摇晃至完全融化，融化时间不超过2min；
tips：若液氮或冰箱距离细胞房较远，细胞需要放在干冰或冰盒上运送至细胞房。
水浴时使用一次性PE手套包住冻存管避免直接接触水源，避免污染。
3. 直接将冻存管900-1000rpm 3min离心，同时在培养瓶中加入适量新鲜培养基；
4. 离心完成后弃上清，吸取1mL新鲜培养基轻轻重悬细胞，吹散细胞后接种到培养瓶中；
5.使用十字法或8字法将细胞混匀后置于培养箱中培养。
tips：整个细胞复苏过程在尽可能5-10min内完成。
 
06、MM.1S细胞收货攻略
 
1. 拆封包装盒，确认细胞，说明书等是否齐全，收货细胞名与所购买细胞是否符合；
2. 观察细胞培养瓶是否完好，有无漏液，培养瓶内培养基是否有肉眼可见的絮状物或者浑浊等，发现异常及时拍照联系销售人员；
3. 确认无异常后，将培养瓶表面消毒，然后撕掉封口膜竖立放入培养箱平衡4h左右，让悬浮细胞沉下培养瓶底部；
4. 平衡过程中可以仔细阅读细胞说明书，知悉细胞所需培养体系，培养环境以及培养注意事项等；
5. 平衡完成后竖立取出细胞培养瓶，此时大部分细胞沉在培养瓶底部，小心吸取上清至离心管中，保留10mL左右培养基在培养瓶内，小心操作，尽量不要吸到沉在底部的细胞；
6. 将离心管1200rpm，5min离心收集未沉下培养瓶底部的细胞，上清可以4℃保存，后续用于培养细胞，以平稳过度到自己的培养基。将收集到的细胞接种至原培养瓶；
7. 观察细胞，根据细胞状态，以及团块数量、大小决定传代或继续培养。
 
常见问题及解决方案
 
培养过程中细胞碎片较多怎么处理？
1. 细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，大部分细胞都会有这种现象，只是不同细胞颗粒多少有区别，细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加，建议使用合适的培养条件。
2. 细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，可通过900-1000rpm，3min离心以去除部分碎片。少量碎片不影响细胞生长，不建议频繁离心。
 

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