文献标题：The core cellular network modulates immune phenotype switching in hepatitis B
发表期刊：Science Bulletin（IF 21.1）
DOI：https://doi.org/10.1016/j.scib.2025.03.038
核心试剂：五色多重荧光免疫组化试剂盒（abs50013）、柠檬酸钠-EDTA抗原修复液（abs9249）

一、研究思路：多维度解析乙肝免疫表型转换的核心逻辑
乙肝病毒感染的临床异质性极强，不同阶段（免疫耐受期 IT、免疫活动期 IA、非活动期 ICI 及急性乙肝 AHB）的免疫状态差异显著，但其核心调控机制尚未完全阐明。本研究团队以 “临床样本分层 - 多组学技术整合 - 功能验证” 为核心思路，构建了全面的研究体系：

样本体系：收集 18 例乙肝患者肝活检样本、15 例配对外周血样本（覆盖 IT/IA/ICI/AHB 四阶段），以及健康对照样本，严格排除干扰因素确保样本纯度；

技术矩阵：整合单细胞 RNA-seq、空间转录组、多重免疫组化、TCR/BCR 测序、体外 PBMC 刺激等技术，实现 “细胞亚群 - 基因表达 - 空间定位 - 功能验证” 的全链条解析；

核心目标：揭示乙肝不同阶段肝内及外周免疫细胞的表型特征、细胞间互作网络，明确调控免疫表型转换的核心通路与分子机制。

关键技术流程示意图：

二、核心研究成果：乙肝免疫调控的三大关键发现
1. CD8+T 细胞亚群分异主导免疫状态转换
研究首次明确肝内 CD8+T 细胞分为两大核心亚群：

• GZMK+ CD8+T 细胞：在 AHB 和 IA 阶段占比更高，具有肝驻留性和耗竭表型（高表达 CXCR6、PDCD1），通过 FasL/Fas 或 IFN-γ 介导细胞毒性；
• GZMB+ CD8+T 细胞：在 IT 阶段富集，依赖穿孔素发挥细胞毒性，且与临床炎症指标呈负相关。

通过伪时间轨迹分析，进一步发现乙肝特异性 CTL（hpCTL）存在三种细胞状态，IA 阶段以 FASLG+ State3 为主，IT 阶段以 GZMB+PRF1+ State1 为主，为不同阶段免疫干预提供了靶点（对应原文图 S3a、S8）。

2. 多细胞互作网络调控免疫耐受与激活

• 肝细胞：门脉周围肝细胞（Hep2）在 IT 阶段 HBV 感染率更高，MHC-I 基因高表达但共刺激分子（CD40、CD80）低表达，介导 CD8+T 细胞功能障碍；
• 巨噬细胞：MRC1+CDH5 + 枯否细胞高表达抗原提呈相关分子（HLA、TAP1）及共刺激分子，在 AHB/IA 阶段增强 IL-2 信号，可挽救 CD8+T 细胞功能；
• 调控通路：IA 阶段 PGE2-EP4 信号通路激活（血浆 PGE2 水平与 ALT 正相关），抑制 CD8+T 细胞细胞毒性；IL-33 + 肝窦内皮细胞、DC-SIGN + 巨噬细胞介导的 2 型免疫抑制在 IA 阶段显著增强（对应原文图 S5、S6）。

3. 临床关联：免疫细胞亚群与疾病进展密切相关
CD8 + 耗竭 T 细胞、Treg、CXCL13+ Tfh 细胞与血浆 ALT 水平、肝组织炎症分级呈正相关，而 GZMB+ CD8+T 细胞呈负相关，为乙肝临床预后评估提供了潜在生物标志物（对应原文图 S11）。

三、Absin 产品赋能关键实验：多重免疫组化的核心工具
本研究中，多重免疫组化技术作为解析肝内细胞定位与表型的关键手段，离不开 Absin 两大核心产品的稳定支持：
1. 核心产品清单

产品名称	产品货号	应用场景
TSA 5-color kit	abs50013	多重免疫组化荧光染色
Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution	abs9249	甲醛固定石蜡切片（FFPE）抗原修复

2. 产品在研究中的核心作用
（1）Citrate-EDTA 抗原修复液（abs9249）：实验成功的基础保障
应用环节：肝组织 FFPE 切片多重免疫组化前处理；
核心作用：甲醛固定会导致抗原表位交联遮蔽，abs9249 通过柠檬酸盐 - EDTA 缓冲体系，在微波加热条件下高效修复抗原表位（原文步骤：“transferred to preheated Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution (abs9249, Absin) before being heat-treated using a microwave for 15 minutes”），确保后续一抗能够特异性结合靶标分子；
实验价值：为 CD8、GZMK、GZMB 等关键标志物的高效检测奠定基础，是免疫染色信号清晰的前提。

（2）TSA 5-color kit（abs50013）：多标志物同步可视化的核心工具
应用环节：肝组织中 CD8+T 细胞亚群及功能分子的多重标记；
核心作用：采用酪酰胺信号放大（TSA）技术，可在同一张切片上同时检测 5 种靶标（CD8、GZMK、GZMB、Transferrin、DAPI），通过不同荧光通道区分，实现细胞亚群定位与功能表型的同步分析（原文步骤：“paired with TSA 5-color kit (abs50013-20T, Absin). Finally, they were stained with DAPI”）；
实验价值：清晰呈现 GZMK+ CD8+T 细胞、GZMB+ CD8+T 细胞在肝组织中的空间分布，以及与肝细胞、巨噬细胞的共定位关系，为 “细胞互作调控免疫表型” 的结论提供直接可视化证据（对应原文图 S2c：CD8+T 细胞亚群染色结果；图 S4i：肝组织中关键分子表达定位）。

3. 对应原文关键图片展示

原文图片	图片内容	Absin 产品贡献
图 S2c	乙肝患者肝组织中 CD8+T 细胞亚群（GZMB+、GZMK+）荧光染色结果	abs9249 保障抗原暴露，abs50013-20T 实现多标志物同步显色，清晰区分不同功能 CD8+T 细胞
图 S4i	肝组织中 AREG、EGFR 等分子的空间表达定位	TSA 试剂盒的高灵敏度荧光信号放大，确保低表达靶标的有效检测
图 S1b/d	肝内细胞亚群聚类及不同阶段占比分析	多重免疫组化结果为单细胞测序的细胞类型注释提供验证依据

四、Absin：科研探索的可靠合作伙伴
本研究通过多维度技术解析乙肝免疫调控机制，其成果的发表离不开精准高效的实验工具支持。Absin 的 TSA 多重染色试剂盒与抗原修复液，凭借稳定的性能、高效的效果，成功助力研究团队完成肝组织多标志物的精准检测，为核心结论的验证提供了关键技术支撑。

在免疫表型分析、肿瘤微环境解析、传染病免疫机制等研究领域，Absin 始终以 “提供高品质科研工具” 为核心，持续优化免疫组化、流式检测、分子生物学等系列产品，助力科研人员突破实验瓶颈，加速科研成果转化。

未来，Absin 将继续深耕生命科学研究需求，推出更多适配前沿技术的创新产品，与全球科研工作者携手，探索生命奥秘，推动医学进步！

文中使用产品

货号	名称	规格
abs50013	五色多重荧光免疫组化染色试剂盒	20T/50T/100T
abs9249	柠檬酸钠-EDTA抗原修复液	100mL

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