细胞划痕实验是解析细胞迁移的常规实验，常见于肿瘤学、发育生物学、再生医学等领域。其核心实验逻辑为：在融合生长的细胞单层上用移液枪头划一道均匀的“划痕”（模拟体内组织损伤的“伤口”），洗去划落的细胞后继续培养，通过不同时间点观察划痕区域的细胞迁移、填充情况，量化细胞的运动能力。

细胞划痕实验的工作流程：

01实验准备
（温馨提醒：提前1-2天完成，避免操作仓促）
1. 细胞准备：复苏目标贴壁细胞，传代培养至对数生长期（细胞活性 80%-90%，迁移能力最强，避免老化细胞）；
2. 耗材试剂：6 孔板 / 12 孔板（最常用，划痕视野适中）、无菌 10μL/200μL 移液枪头（统一规格，保证划痕宽度一致）、无血清培养基 / 低血清培养基（抑制细胞增殖，聚焦纯迁移；若需研究 “增殖 + 迁移”，用常规完全培养基）、PBS 缓冲液、明美活细胞扫描分析仪MCS31
3. 耗材预处理：孔板可提前做标记（在板底背面划横线，等距分布，方便后续定位同一划痕区域拍照）。
 

02铺板培养
（核心前提：形成致密细胞单层，单层无间隙）
1. 取对数生长期细胞，胰酶消化后用完全培养基重悬，计数并调整细胞浓度（如 6 孔板约 5×10⁵个 / 孔，12 孔板约 2×10⁵个 / 孔，根据细胞大小微调）；
2. 按定浓度将细胞悬液加入标记好的孔板，轻轻晃动使细胞均匀分布，避免局部堆积；
3. 置于 37℃、5% CO₂培养箱中培养24-48h，直至细胞形成100% 融合的致密单层（单层无空隙，否则会干扰划痕愈合结果判断）。

03画制划痕
（核心关键：划痕均匀，无偏移、细胞残留）
1. 取出培养板，超净台内操作，用无菌移液枪头（同一规格），沿板底提前划好的横线垂直匀速划过细胞单层（可用孔板盖子作为划线工具，避免斜划）；
2. 划完后轻提枪头，避免刮擦孔底导致细胞层脱落，肉眼观察划痕为清晰、连续的空白线条即可。

04清洗细胞
（去除划落的细胞碎片，避免碎片干扰愈合）
1. 划痕后，孔内会有大量划落的细胞和碎片，用无菌 PBS 缓冲液轻轻润洗细胞层2-3 次；
2. 润洗时缓慢滴加 PBS，沿孔壁流下，避免直冲划痕区域导致细胞脱落，最终洗去所有悬浮的细胞和碎片，使划痕区域无残留。

05加液培养
（定时放置培养，根据实验目的选培养基）
1. 按实验目的加入对应培养基：研究纯细胞迁移：加入无血清 / 低血清培养基（血清含生长因子，会促进细胞增殖，低血清可最大程度抑制增殖）；研究增殖 + 迁移共同作用：加入常规完全培养基；

2. 将培养板放回 37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，做好实验计时（从加液完成开始）。

06记录划痕愈合过程
（定位拍照，保证视野一致）
使用明美活细胞扫描分析仪MCS31的细胞划痕模块，应用划痕分析。

图1 MCS31及其细胞划痕检测界面

MCS31能够轻松完成细胞划痕的监测与分析：

• 可以自动识别划痕区域
• 准确定位同一视野下的细胞划痕，使测量保持一致
• 自动分析划痕面积变化，最大限度提高实验效率，减少人为误差
• 生成延时视频，突破传统的终点法测量，实现细胞划痕的动态观察。