在蛋白纯化过程中，样品前处理通常是最容易忽略但也是非常重要的一环。一个成熟的样品前处理方法，不仅能保护昂贵的层析柱，也能显著提高纯化的纯度和效率。

以大肠杆菌体系表达重组标签蛋白纯化为例，完整的样品前处理过程应该包括以下几步：

1、菌体收获
1.1收集菌体
操作：4℃、6000–8000 rpm 离心 10–15 min收集菌体，弃上清。
作用：获得大量表达目标蛋白的大肠杆菌

1.2洗涤
操作：用预冷 PBS 或结合缓冲液（Binding buffer） 重悬洗涤 1–2 次，离心弃上清。

2、细胞破碎
操作：使用加入蛋白酶抑制剂、EDTA（可选）、DTT（可选） 的结合缓冲液重悬沉淀。冰上超声破碎（功率 30%–40%，超 3s 停 5s，总时间 10–20 min）。
作用：破碎菌体，释放目标蛋白

3、离心澄清
操作：4℃、12000–16000g 离心 20–30 min，取上清

4、样品&缓冲液过滤
PART 1 缓冲液过滤
结合缓冲液和洗脱缓冲液一般都是使用自配体系，其质量直接影响层析柱的寿命和纯化效果。在使用之前，需要使用0.2μm 或者0.45μm滤器/滤膜进行除菌和脱气。
操作：将0.2 μm或0.45 μm孔径的滤器放置在收集瓶口，启动真空泵对配制好的缓冲液进行抽滤

作用：
1、去除缓冲液中可能存在的细菌和微小颗粒，防止它们堵塞层析柱，保护柱床和系统管路；防止细菌进入层析柱和系统管路造成污染；
2、去除缓冲液中的气体，避免在层析系统中产生气泡，影响紫外检测的准确性。防止气泡进入层析柱影响层析效果。

PART 2 样品过滤
细胞破碎和离心后，样品中仍然含有少量细胞碎片、核酸、不溶性蛋白等杂质，如果直接上样，会堵塞和损伤层析柱。因此需要预先使用0.2μm 或者0.45μm滤器/滤膜进行过滤。

操作：
1、准备一个干净的收集管。
2、将离心后的上清液用注射器吸入，安装上针头滤器，缓慢推注过滤，收集过滤液。

作用：
低蛋白吸附滤器能够去除样品中的杂质，避免堵塞层析柱和系统，同时也能尽量减少目标蛋白在过滤过程中的损失，保证回收率。

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