（1）荧光编码微球：直径 5.6μm 的聚苯乙烯 / 磁性微球，通过两种荧光染料不同比例染色，形成多达 100 种独特荧光谱的微球亚群，每种微球包被特异性捕获抗体。

（2）夹心免疫反应：混合编码微球与样本孵育，目标分子与对应微球捕获抗体结合；加入生物素化检测抗体，形成 “微球 - 捕获抗体 - 目标分子 - 检测抗体” 夹心复合物；再加入链霉亲和素 - 藻红蛋白（PE），标记复合物。

（3）双信号检测：仪器双激光读取信号 —— 一束识别微球荧光编码（确定指标种类），另一束检测 PE 荧光强度（定量目标分子浓度）。

• 超高通量：单管同步检测2-100 种指标，50μL 样本即可完成，大幅提升检测效率。
• 高灵敏度：检测下限低至0.01pg/mL，可精准捕获低丰度细胞因子。
• 宽线性范围：动态范围达3.5-6 个数量级，减少样本稀释步骤，降低误差。
• 灵活性强：微球可自由组合，按需定制检测 panel，适配不同研究需求。

 
（二）MSD 电化学发光多因子检测

（1）电极板与抗体包被：96/384 孔石墨电极板，每孔底部含多个独立碳电极点，各点包被不同捕获抗体。

（2）夹心反应与标记：加入样本与 SULFO-TAG™（钌联吡啶衍生物）标记的检测抗体，孵育形成夹心复合物。

（3）电化学发光与检测：电极板通电后，三丙胺（TPA）氧化引发 SULFO-TAG™发光（620nm 光子），CCD 相机捕获信号，强度与目标分子浓度正相关。

• 超敏检测：灵敏度达fg/mL 级别（0.05-1pg/mL），线性范围5-6 个数量级，适配极低丰度标志物检测。
• 低基质效应：电信号激发与光信号检测解耦，背景干扰极低，适配血清、细胞上清等复杂样本。
• 样本用量少：单孔上样量≤25μL，单孔可检测10 种指标，珍稀样本友好。
• 重复性优异：板内 CV<6-8%，板间 < 10%，批间 < 15%，数据稳定性强。

 
（三）流式 CBA 多因子检测

（1）荧光微球捕获：不同荧光强度的微球包被特异性捕获抗体，形成 “捕获微球”，与样本中目标因子结合。

（2）夹心复合物形成：加入 PE 标记的检测抗体，形成 “捕获抗体 - 目标因子 - PE 检测抗体” 三明治复合物。

（3）流式信号分析：流式细胞仪检测微球荧光（区分指标）与 PE 荧光强度（定量浓度），软件分析数据。

• 设备兼容度高：无需专用仪器，常规流式细胞仪（如 BD Canto）即可检测，降低实验门槛。
• 快速高效：检测周期3-4 小时，远快于 ELISA（12-24 小时），适配快速实验需求。
• 高性价比：单管 25-50μL 样本可检测5-30 种指标，试剂成本低，适合大规模筛选。
• 灵敏度达标：常规灵敏度达pg/mL 级别，高敏试剂盒可达 0.274pg/mL，满足多数科研需求。

技术对比总结：

 
二、细胞上清样本处理标准流程与注意事项

• 条件：4℃、300g、离心 10 分钟
• 目的：沉淀完整细胞、细胞碎片及大颗粒杂质，获取初步澄清上清。

• 条件：4℃、3000g、离心 10 分钟（或 4℃、10000g、离心 15 分钟）
• 目的：去除微小细胞碎片、蛋白聚集体等残留杂质，避免后续检测中非特异性结合。

• 分装：取离心后澄清上清，分装至无菌 EP 管，每管 100-300μL（单次检测用量，避免反复冻融）。
• 保存：-80℃超低温冻存，严禁 - 20℃长期保存（易导致蛋白降解）；样本反复冻融≤2 次，否则目标蛋白活性下降，检测结果偏低。

  
（二）细胞上清样本处理注意事项
（1）无血清培养样本蛋白稳定化：无血清培养基中蛋白易吸附于管壁或降解，需添加5-10% 胎牛血清（FBS）或 0.5-1% 牛血清白蛋白（BSA），封闭非特异性吸附位点，稳定目标蛋白。
（2）残留沉淀二次去除：转移上清时若观察到微量沉淀，需再次4℃、3000g 离心 10 分钟，确保上清无杂质，避免堵塞检测仪器或干扰反应。
（3）样本稀释规范：细胞上清通常无需稀释可直接检测；若需稀释使检测值落在标准曲线范围内，稀释液必须含与标准品相同浓度的血清或 BSA，避免基质差异导致结果偏差。
（4）实验复孔设置：细胞培养时建议设置3-6 个复孔，消除边缘效应、培养环境差异带来的误差，保证数据可靠性。
（5）培养基选择：血清中含大量外源性细胞因子，干扰检测结果，优先采用无血清或低血清（≤2%）培养基培养细胞。
（6）培养时间优化：不同细胞分泌细胞因子的峰值时间不同（如免疫细胞 24-48 小时，肿瘤细胞 48-72 小时），需预实验确定最佳培养时间，避免因子浓度过低或降解。

三、细胞上清多因子检测服务哪个公司提供？
细胞上清多因子检测对技术平台、实验操作及质量控制要求极高，选择专业服务机构可保障数据准确性与可靠性。