在药物早期筛选、临床前研究与临床大规模 Biomarker 检测中，常涉及到血液样本的检测。传统方法 (如ELISA) 需离心分离血浆 / 血清、反复洗板，不仅耗时耗力、易引入误差，灵敏度也不高，更难以支撑384或1536 孔级高通量需求。

瑞孚迪 (Revvity) HTRF (均相时间分辨荧光) 与 Alpha（放大发光邻近均相检测）均相检测技术，以 “免洗、直接测、抗干扰、高灵敏” 四大核心优势，彻底打破血液样本筛选瓶颈，可直接用于全血样本的检测，为从早期药物发现到临床样本分析的全流程，提供高效、可靠的解决方案。

为何选择均相检测方法？

HTRF和Alpha具有四大核心优势：

✅ 免洗，流程极简

✅ 特异性高

✅ 超高灵敏度和宽动态范围

✅ 微量样本适配全血高通量筛选

1.真正 “免洗”，流程极简

传统 ELISA：包被→封闭→洗板→加样→孵育→洗板→显色→终止，耗时 5-6 小时；

瑞孚迪均相技术：加样→孵育→读数三步完成，无需任何洗涤步骤，2小时出结果；

适配自动化工作站，无缝对接 96/384/1536 孔板，单日可完成数万样本筛选。

2. 特异性高：全血直接进样，抗干扰能力拉满

无需离心、无需去除红细胞 / 溶血产物，5-10μL 全血即可直接检测；

过敏原刺激后组胺检测

HTRF组胺测定流程

采用四份独立全血样本 (供体 A～D)，分别测定组胺自发性释放量，以及经 5 种过敏原混合液刺激后的释放量；五种致敏原分别为：禾本科杂草 混合过敏原、屋尘螨、猫上皮、吸入性过敏原组合、豚草过敏原

HTRF时间分辨技术屏蔽全血基质、血红蛋白、细胞碎片干扰；兼容溶血、高脂等异常样本，结果稳定性与重复性远超传统方法。

3. AlphaLISA SureFire Ultra（ALSU）——超高灵敏度 + 宽动态范围，低丰度靶点轻松测

AlphaLISA SureFire Ultra是具有稳定的高灵敏和免洗的优势对人体全血中磷酸化蛋白的应用，为传统检测方法提供了一种强大、节省时间的替代方案。全程不用洗板、一步加样，直接从少量稀释的人类全血中高灵敏度（可达到飞克级），最快2个小时左右检测总蛋白和磷酸化蛋白。

AlphaLISA SureFire Ultra在全血中的工作流程

全血是一个高度复杂的生物基质，由红细胞、血小板、血浆和白细胞群组成，包括淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。使用免疫分析技术测量全血细胞内生物标志物的能力历来有限。血清引起的基质效应蛋白质、红细胞、细胞碎片和其他非特异性相互作用可能会干扰测定性能和灵敏度，而磷酸化事件对样品处理和加工时间高度敏感，进一步使工作流程复杂化。

因此，测量细胞内蛋白质通常需要在分析之前进行复杂的样品准备。传统方法通常涉及分离特定的细胞群体，如外周血单核细胞 (PBMCs)、单核细胞或分化的原代巨噬细胞，然后使用基于洗涤的检测方法，如 ELISA 或WB。这些工作流程耗时较长，窗口较小，通量低，动态范围和灵敏度有限，也引起显著的数据重复性差。

AlphaLISA SureFire Ultra技术解决了以上痛点，通过使用均匀、无冲洗的工作流程，以最少的样品准备量，实现对全血中细胞内总体和磷酸化蛋白的稳定、高灵敏检测。该平台消除了对细胞分离技术和冲洗步骤的需求，并显著缩短了样品处理时间，以保持天然信号状态。这种方便、可扩展的工作流程支持跨多个治疗领域、应用和模式的关键细胞内蛋白质的快速、可重复评估。用于测量关键信号传导蛋白 (如 MEK1、ERK1/2、p38和STAT1/3/5/6)，监测 PROTAC 介导的降解，也可探索检测全血、PBMC 和原代巨噬细胞模型中 IRF5 等低表达靶点。

全血中MAPK通路的激活

来自两名健康捐赠者的全血裂解物在指定浓度和时间下经一系列激动剂和细胞因子 (胰岛素、PMA、LPS、1L-1B、IL-4、IL-6、IFN-α、IFNγ和EGF) 处理。随后对样本进行裂解分析，以检测pMEK1 (Ser218/222)、pERK1/2 (Thr202/Tyr204)、p38 (Thr180/Tyr182) 的情况，所用试剂为AlphaLISA SureFire Ultra试剂盒。所呈现的数据对应于1:10或1:20的稀释比例

支持单孔多重检测（AlphaPlex），同步定量 2 种靶点（下图所示3种微珠，但是受限市面上酶标仪只能同时检测2个通道信号），节省珍贵样本、提升筛选效率。

4. 仅需微量样本，高性价比完全替代传统ELISA方法

反应体系仅需5-10μL，大幅减少全血样本消耗量，尤其适合珍贵临床样本、小动物模型（如小鼠尾静脉血）；省去传统ELISA洗板、包被抗体等，降低 80% 以上人力成本。

下图取自 3 名健康志愿者的全血样本，比较HTRF 和ELISA 方法，分别检测经R848（TLR7/8 通路激动剂） 刺激后产生的IL-8 的分泌水平的EC50 ，以及检测Dexamethasone（地塞米松）处理后抑制IL-8 的分泌水平的IC50。

可以看出R848的EC50和地塞米松的IC50在HTRF和ELISA方法得到的数值相似，所以从节约样本和人力成本的角度看，HTRF完全可以替代ELISA。

应用场景

从药物发现到临床转化，瑞孚迪均相技术为生命科学研究提供高效、稳定、经济的全血样本检测解决方案，助力科研加速突破。

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