该修饰以细胞内乳酸为前体，先经代谢转化生成乳酰辅酶 A，再在酰基转移酶的催化下，将乳酰基团共价连接到蛋白质的赖氨酸残基侧链上，修饰底物既包括核内组蛋白，也涵盖胞质与胞膜的非组蛋白。作为一种动态可逆的调控方式，乳酸化修饰的稳态由两类功能蛋白精密维持：以 P300 为代表的 “写入酶” 介导修饰的发生，以 HDACs 家族为代表的 “擦除酶” 负责修饰的去除。该修饰可通过改变蛋白质的空间构象与分子互作能力，调控基因转录、免疫细胞极化、能量代谢重编程等多种核心生理过程，其异常调控与肿瘤进展、炎症疾病、心血管病变及神经退行性疾病的发生发展高度相关，具备重要的基础研究与临床转化价值。

组蛋白乳酸化位点

组蛋白与非组蛋白乳酸化过程

1、位点特异性抗体 WB 检测 针对已有文献报道的已知修饰位点，研究者可采购商业化位点特异性抗体，通过 Western Blot（WB）实现修饰水平的定性与半定量分析。但该方案高度依赖已有的研究基础，若目标蛋白的乳酸化修饰尚无报道、无对应位点抗体可用，研究将无法推进，极大限制了新靶点、新修饰位点的探索。

2、IP 富集联合定点突变验证 通过免疫沉淀（IP）技术富集样本中的目标蛋白，结合乳酸化泛抗体进行 WB 检测，可初步判断目标蛋白是否携带乳酸化修饰；后续需构建赖氨酸定点突变体，通过回补实验确认具体修饰位点。该流程操作步骤繁琐、实验周期长，且富集效率直接影响检测灵敏度，低丰度蛋白极易出现假阴性结果。

3、修饰组学质谱全局鉴定 利用乳酸化泛抗体偶联的磁珠富集样本中全部乳酸化修饰肽段，结合液相色谱 - 串联质谱进行全蛋白组层面的修饰位点鉴定，可一次性实现修饰位点的批量筛查。但该方法样本需求量大、检测成本高、生物信息分析周期长，更适用于初筛阶段的全局扫描，并不适合快速验证单个目标蛋白的修饰状态。

针对上述技术痛点，临近链接技术（Proximity Ligation Assay, PLA）提供了全新的原位检测方案，可在细胞原位快速、精准地判定目标蛋白的乳酸化修饰状态，让低丰度的修饰事件也能被清晰捕获。

检测体系包含一对分别靶向不同表位的一抗，对应结合目标蛋白本体与乳酸化修饰基团；随后加入标记有单链寡核苷酸的 PLA 探针二抗，分别与对应的一抗结合。当目标蛋白发生乳酸化修饰时，两个抗体探针因结合同一分子而空间距离小于 40 nm，此时加入的桥接寡核苷酸可与两条探针的末端序列互补配对，在连接酶催化下形成闭合环状 DNA 模板。

随后体系启动滚环扩增（RCA）反应，以环状 DNA 为模板生成包含数百个重复单元的长链 DNA 产物；最终加入荧光标记的检测探针，与扩增产物互补杂交后形成离散的荧光斑点，单个斑点即对应一个发生了乳酸化修饰的蛋白分子。该技术通过双抗体识别保障检测特异性，通过核酸扩增实现信号级放大，兼具 ELISA 的高特异性与 qPCR 的高灵敏度，突破了传统免疫荧光的检测极限。

相较于传统检测方法，PLA 技术应用于蛋白乳酸化修饰检测具备多重核心优势：
1、原位检测，保留空间信息：可直接在细胞或组织切片原位完成检测，直观呈现修饰的亚细胞定位与组织分布，无需提取蛋白或破碎样本，更贴近生理真实状态；
2、高灵敏度，低丰度可检：依托核酸信号放大机制，可捕获低丰度的修饰事件，检测灵敏度远高于常规免疫荧光；
3、可定量分析：配套图像分析软件可对荧光斑点进行计数与强度统计，实现修饰水平的精确定量；
4、实验周期短：可在数天内完成目标蛋白修饰状态的判定，大幅缩短研究验证周期。

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