做分子实验的人，谁还没被电泳虐过几次？条带模糊、Marker失踪、孔里一片亮……重提样品半小时，结果还是翻车。其实90%的问题都有迹可循，按下面的顺序逐一排查，就能少走弯路。

对照完毕，就可以进入正式排查了。

• Marker正常 → 查样品和操作
• Marker也翻车 → 查电泳体系

顺手核对三件事：Marker过期没？拿错低浓度Marker没？对应泳道漏加染料没？Marker条带清晰、大小齐全、亮度均匀，才算正常。

• 点样孔靠近负极，核酸向正极跑。插反了，样品直接跑进缓冲液。
• 跑太久，小分子直接冲出凝胶末端，也会造成"无条带"的假象。

• 制胶加染料：加够了吗？琼脂糖太烫时加会导致染料失活；摇匀了吗？
• 后染色法：时间够吗？染料过期或稀释过度了吗？反复用了多少次了？
• 成像环节：荧光通道选对了吗？比如Gel Red选了EB通道，拍出来就是黑的。

• 浓度够不够？算一下上样体积里的核酸总量，低于检测限就先浓缩。
• 降解了没？基因组DNA/RNA降解呈连续弥散拖尾；质粒降解则超螺旋带变弱、杂带增多。
• 杂质多不多？蛋白、多糖、盐分残留会导致孔亮、拖尾、迁移受阻。
• 有沉淀没？上样前离心，避免沉淀堵孔。

• 浓度匹配：胶浓度要和片段大小对应，错配等于白跑。
• 完全融化：有未溶颗粒？加热摇匀到无白点。
• 凝固充分：没凝固就拔梳子，会导致孔壁破损、样品渗漏、条带歪斜。
• 琼脂糖质量：反复加热、过期的琼脂糖分离效果差，条带容易弥散。

• 不要反复用：TAE/TBE用1-2次就换，离子耗尽、pH漂移会导致跑不动、模糊、微笑带齐上阵。
• 别直接用10×浓缩液：电流暴增、凝胶发热、条带降解。
• 液面高度：刚没过胶面1-2mm。太高电流不均，太低胶面干了，条带都会歪。

• 电压太高 → 产热多 → 胶中间比两侧热 → 中间跑得快 → 微笑条带。
• 持续高温 → 凝胶局部融化 + 核酸降解 → 条带弥散，RNA电泳尤其明显。

建议：常规琼脂糖电泳80-120V，大胶可降至60-80V，稳一点不亏。

• 梳子插歪 / 拔梳子太猛扯坏孔壁 → 条带跟着歪
• 制胶板没放平 → 胶厚薄不均 → 两边电阻不同 → 条带倾斜
• 电泳槽没放平 → 液面一边高一边低 → 电流不均 → 条带斜着跑
• 梳齿残留琼脂糖没清干净 → 堵孔 → 样品跑不出来 → 孔亮

建议把这篇排查指南收藏起来，下次跑胶前翻一遍，省时省力少翻车。