关键词：特应性皮炎；培土清心方；鞘脂代谢

鞘脂代谢失调在特应性皮炎（AD）中发挥关键作用，然而针对该通路的治疗选择仍然有限。传统方剂培土清心（PTQX）显示出临床疗效，但其分子机制在很大程度上尚未明确。近期广东省中医院莫秀梅、李红毅、晏烽根团队在Phytomedicine(IF 11.3)上发表文章“Peitu Qingxin formula ameliorates atopic dermatitis by targeting the multi-omics-informed miR-30a/GAPR-1 axis in sphingolipid metabolism”，研究揭示了PTQX通过靶向miR-30a/GAPR-1轴恢复皮肤鞘脂稳态从而改善AD的分子机制，为AD治疗提供了新的策略。

· 维真助力 - 腺病毒·

基因信息：GAPR-1，高尔基体相关病程相关蛋白1

实验动物：雄性BALB/c小鼠（6~8周龄）

病毒产品：Ad-GAPR-1、Ad-shGAPR-1、Ad-NC

注射方式：皮内注射

病毒用量：四点注射，50ul/site，0.5~3×10^9 PFU/ml

结果展示

1. MiR-30a过表达可下调GAPR-1，恢复AD样3D皮肤等效物的屏障完整性

作者利用孟德尔随机化、临床蛋白质组学及双荧光素酶报告基因实验，鉴定出miR-30a是GAPR-1的直接上游调控因子，并进一步评估了miR-30a在AD中的治疗潜力，发现miR-30a过表达（OE）组中GAPR-1蛋白表达显著减少、TEER显著升高、IL-8分泌量显著降低。HE染色组织学检查显示，OE组表皮厚度得以恢复，存活角质形成细胞层增加，与屏障相关的蛋白表达恢复至接近正常水平。这些数据共同表明，miR-30a在AD样3D皮肤等效物中的过表达能有效下调GAPR-1，通过功能、组织学和分子层面的改善恢复表皮屏障的完整性。

图1 MiR-30a过表达下调GAPR-1恢复AD样3D皮肤等效物的屏障完整性

2. 分子对接预测PTQX成分与GAPR-1具有高亲和力，表皮GAPR-1沉默可改善AD病理并恢复皮肤鞘脂稳态

为探究PTQX是否通过GAPR-1介导的鞘脂代谢发挥抗AD作用，作者通过分子对接分析以预测潜在相互作用，结果提示PTQX成分可结合GAPR-1。基因沉默实验发现，Ad-shGAPR-1组小鼠的皮炎评分显著降低，表皮厚度减小。靶向脂质组的生信分析显示AD 模型组 (NC) 分别与正常对照组 (Ctrl)、shGAPR-1组进行比较，鞘脂代谢通路在两次比较中均位居富集前列；AD模型组中有11种鞘脂代谢物表达水平显著下调，而在GAPR-1沉默后，上述多数代谢物表达水平得到回升。皮尔逊相关性分析显示，3种代谢物与皮炎评分呈显著负相关，8种代谢物与GAPR-1相对表达水平呈显著负相关，1种代谢物与表皮厚度呈显著负相关。此外己糖二神经酰胺与AD相关表型及GAPR-1表达水平均呈显著负相关。这些数据表明，GAPR-1基因沉默可改善AD诱导的鞘脂代谢紊乱。PTQX组分与GAPR-1的预测高结合亲和力提示，PTQX可能通过GAPR-1缓解AD病理进程并恢复鞘脂稳态。机制研究发现PTQX通过靶向miR-30a介导的信号轴改善AD炎症。

图2 分子对接预测PTQX组分与GAPR-1具有高亲和力结合，表皮GAPR-1沉默可改善AD病理并恢复皮肤鞘脂稳态

3. PTQX通过调节miR-30a/GAPR-1轴恢复AD鞘脂稳态

为探究PTQX是否通过纠正miR-30a缺乏引起的代谢重编程来发挥其治疗作用，作者对皮肤病变进行了蛋白质组学和非靶向代谢组学分析。发现miR-30a缺失（KO组）显著干扰了脂质代谢，10个与鞘脂代谢相关的蛋白质显著下调，而PTQX治疗（KO-PTQX组）有效地逆转了这些蛋白质中大多数的抑制作用。基因集富集分析（GSEA）显示，KO-模型小鼠中神经酰胺和鞘脂代谢通路的下调被PTQX给药显著阻断并恢复。与蛋白质组学数据一致，非靶向代谢组学分析表明，鞘脂代谢是区分KO-模型小鼠和WT-模型小鼠的重要富集途径。作者进一步检测了鞘脂代谢途径中的关键酶。发现KO组小鼠表现出鞘脂酶ENPP7和GBA的表达下降，GAPR-1表达增加的趋势，KO-PTQX组逆转了这些改变，显著上调了PSAP、ENPP7和GBA的表达。此外，与WT-PTQX组相比，KO-PTQX组 GBA的表达较低，但GAPR-1蛋白表达较高，这表明PTQX的作用方式依赖于 miR-30a及其靶基因GAPR-1。这些发现表明，PTQX通过靶向miR-30a/GAPR-1轴改善AD，从而恢复与鞘脂代谢相关的蛋白质表达并恢复正常鞘脂稳态。

图3 PTQX通过调节miR-30a/GAPR-1轴来恢复AD中的鞘脂稳态

实验结论

本研究确定了miR-30a/GAPR-1轴能够恢复鞘脂稳态从而改善AD病理状态。PTQX作为一种多成分的草药配方，能够有效作用于这一过程，这提供了一种与传统医学整体原则相一致的有前景的治疗策略。有望开发出PTQX衍生的活性化合物或miR-30a模拟物/GAPR-1抑制剂，可通过口服或透皮给药方式来增强多维度屏障修复。