利用Xevo TQD定量测定基因毒性杂质
2014-08-22 来源:本站 点击次数:2498利用Xevo TQD定量测定基因毒性杂质
Joanne Mather, Dominic Moore, Robert S. Plumb 和 Paul Rainville
沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德)
简介：
烷基磺酸，尤其是甲磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸，作为一类常用 的烷化剂，在制药行业中常被用作烷基化试剂和催化剂，并在API 的化学合成中用于纯化步骤。此外，为了改善化学性质或提高生 物利用度，这些磺酸也常用作药物的最终成盐。
合成反应或再结晶步骤中任何残留醇的存在都可能导致形成磺酸 的烷基酯。许多此类甲磺酸酯、苯磺酸酯或甲苯磺酸酯都被认为 具有基因毒性，而其它酯类也可能存在基因毒性，因此需要在药 物和药品中进行监测。
过去用于分析此类烷基磺酸酯的典型方法均建立在GC/MS或HPLC/UV/ MS的基础之上，其中的衍生化步骤通常需要大约20到30分钟的运 行时间。之前，我们已经展示了如何通过使用UPLC?/MS在不到5分 钟的运行时间内获得良好的结果。
在这篇应用纪要中，我们将会介绍仪器设备的最新进展如何针对 这些基因毒性杂质提供更强的分析能力和易用性。我们还将展示 如何利用具有正负离子切换功能的Xevo TQD所拥有的高灵敏度缩短 此类杂质的分析时间。此外，利用RADAR?降低基质干扰有助于加 快方法开发过程。
实验：
液相色谱条件：
LC系统： ACQUITY UPLC
色谱柱： ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱，
2.1 x 50 mm, 1.8 μm
柱温： 45 ?C
进样体积： 15 μL(20 μL定量环，部分定量环模式)
流动相A： 98 H20 2% MeOH 0.1%甲酸
流动相B： 98 MeOH 2% H2O 0.1%甲酸
| 梯度表 时间(min) |
流速 |
%A |
%B |
曲线 |
|
初始 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
—— |
|
2.50 |
0.600 |
2.0 |
98.0 |
6 |
|
3.00 |
0.600 |
2.0 |
98.0 |
6 |
|
4.00 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
1 |
|
4.50 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
1 |
负离子模式：
毛细管电压： 0.8 kV
功能类型： 3通道的MRM
|
通道反应 |
锥孔电压 |
碰撞能量 |
化合物 |
|
95.00 > 79.90 |
40.0 |
15.0 |
甲磺酸 |
|
157.00 > 79.90 |
45.0 |
24.0 |
苯磺酸 |
|
171.00 > 79.90 |
48.0 |
26.0 |
家苯磺酸 |
正离子模式:
毛细管电压： 0.5 kV
|
通道反应 |
锥孔电压 |
碰撞能量 |
化合物 |
|
173.10 > 77.00 |
25.0 |
16.0 |
甲苯磺酸酯 |
|
187.00 > 77.00 |
25.0 |
22.0 |
苯磺酸乙酯 |
|
187.00 > 155.00 |
30.0 |
10.0 |
对甲苯磺酸甲酯 |
|
201.00 > 173.00 |
25.0 |
10.0 |
对甲苯磺酸乙酯 |
|
229.10 > 91.00 |
40.0 |
20.0 |
2S缩水甘油基对甲苯磺酸酯 |
结果与讨论：
使用乙腈为多种已知基因毒性杂质配制1 mg/mL 标准溶液，然后用5%乙腈将浓度稀释为0.1 至500 ng/mL。此外，还制备了一种样品溶液： 将10 mg苯磺酸氨氯地平片磨碎并溶解，然 后标准添加1.5 μg基因毒性杂质。
借助于IntelliStart，使用各个标准溶液帮助调 谐MS。即便在最佳的色谱性能下，也可能发 生共流出。在采集多重反应监测(MRM)定量 质谱数据的同时，采集来自于基质的定性质 谱扫描数据有助于监测可能的干扰化合物， 从而确保检测的耐用性和重现性。
在RADAR模式下，采集MRM数据的同时可以采 集正离子和负离子模式下整个范围的MS全扫 描谱图。该过程对MRM数据质量基本无影响。 因此，您可以在准确定量目标化合物的同时， 追踪其它样品基质的组分，从而让您对样品 有更加深入的理解。
RADAR功能之所以可以实现，是建立在Xevo TQD在MS、MS/MS、正离子与负离子模式超快 的切换速度且不会影响性能的基础之上的。 使用RADAR辅助LC/MS/MS方法开发，以对加标 药片溶液中的杂质进行分析。利用最终所开 发的方法来验证这套液质系统对基因毒性杂 质检测的线性和灵敏度
结论：
与UPLC联用，串联四极杆检测器Xevo TQD是基因毒性杂质分析的最佳工具。UPLC/Xevo TQD可以提供很好的灵敏度及快速 的分析方法。利用其多种特点，如IntelliStart和RADAR、正负 离子切换以及“所有时间内所有数据”的生成，可快速轻松 地开发出检测的分析方法。这将显著提高了实验室效率， 以应对不断增长的科研和监管需求。