细胞冯库萨（VON KOSSA）染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

细胞冯库萨（VON KOSSA）染色试剂是一种旨在使用银还原技术，分析固定处理的细胞样本中钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良VON KOSSA方法、成功实验证明的。主要适用于动物原生代或培养细胞的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过嗜银染色，钙离子受到强光还原，由金属银沉积取代，呈现黑色。

产品内容

清理液（Reagent A）  250毫升

固着液（Reagent B）   10毫升

染色液（Reagent C）   10毫升

平衡液（Reagent D）   10毫升

产品说明书    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C），避免光照；有效保证6月

用户自备

核固红复染试剂盒（40011）：用于常规染色后复染

60瓦灯：用于还原钙离子

小型染色缸：用于细胞染色操作

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

实验步骤

操作一：细胞载玻片染色

• 样本固着处理
• 取出待测的细胞载玻片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面
• 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
• 室温下，孵育10分钟
• 小心移去载玻片上的固着液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗样品表面
• 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
• 重复实验步骤7至8一次

二、样本染色处理

• 小心加上200微升染色液（Reagent C），铺满整个载玻片样品表面
• 室温下置于太阳光直射或60瓦灯直射孵育60分钟；或直至可见黑色
• 小心移去载玻片上的染色液（Reagent C）
• 室温下，小心将载玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）

三、 样本复染处理

• 小心加上200微升平衡液（Reagent D）在载玻片上，铺满整个载玻片样品表面
• 室温下孵育5分钟（注意：平衡液（Reagent D）具有褪色调节作用）
• 小心移去载玻片上的平衡液（Reagent D）
• 室温下，小心将载玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
• 样本复染处理（核固红）
• 放上盖玻片或封片
• 即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现黑色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）

操作二：24孔细胞培养板染色

一、样本固着处理

1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）

4．每孔加入400微升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5．在室温下孵育10分钟

6．小心抽去固定液（Reagent B）

7．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面

8．小心抽去清理液（Reagent A）

9．重复实验步骤7和8两次

二、样本染色处理

• 小心加上400微升染色液（Reagent C），覆盖整个生长表面
• 室温下置于太阳光直射或60瓦灯直射孵育60分钟；或直至可见黑色
• 小心抽去染色液（Reagent C）
• 室温下，小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室温下孵育2分钟
• 小心抽去清理液（Reagent A）

三、 样本复染处理

• 小心加上400微升平衡液（Reagent D），覆盖整个生长表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心抽去平衡液（Reagent D）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室温下孵育2分钟
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 样本复染处理（核固红）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现黑色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）

注意事项

• 本产品为50次（细胞载玻片）和25次（1个24孔板）操作
• 操作时，须带手套
• 所有操作在室温下进行
• 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
• 样品染色避免过度，肉眼可见黑色即可终止染色
• 建议使用核固红复染试剂盒（40011），增强染色对比度
• 细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰