细胞活性测定的五大方法操作大全
2021-11-12 来源:本站 点击次数:5933各位老师在进行细胞培养实验的时候会不会很好奇 “要怎么判断细胞是死是活呢？它们活的好吗?”
逍鹏生物手把手来教您如何进行判断。
可以简单将分析细胞活力和增殖测定的方法分成5大类：
● 代谢增殖测定
● DNA合成增殖实验
● 化学发光细胞活性测定
● 荧光染料增殖实验
● 台盼蓝细胞计数
以下简单介绍这些分类的几种常见实验方式吧！
代谢增殖测定
MTT检测法活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶，能使额外添加的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan），并沉积在细胞中，死细胞则无此现象。接着用二甲基亚砜（DMSO）溶解沉积在细胞中的甲瓒后，可利用酶标仪490nm波长测光吸收值，依据吸光值（OD值）计算出活细胞数量。在一定细胞数范围内，吸光值与细胞活性成正比。
△ 图例
XTT检测法
与MTT原理相似，皆是利用添加物与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶反应，并利用酶标仪测定产物光吸收值；不同于MTT法的是，XTT法还原产物是水溶性的橙黄色甲肷，不需经过二甲基亚砜（DMSO）溶解步骤，即可直接测定光吸收值（BI，货号：20-300-1000），操作较MTT方便快速。当XTT与电子耦合剂作用后产生的水溶性甲肷吸光值与活细胞数成正比。
△ 图例
DNA合成增殖实验
BrdU检测法BrdU为胸腺嘧啶核苷（Thymine）的衍生物，可用于标记活细胞中新合成的DNA（细胞活性周期S期），BrdU可随着DNA复制进入子细胞，因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记，可通过抗BrdU单克隆抗体检测，借此检测细胞的增殖能力，但BrdU单克隆抗体检测过程需要将部分DNA变性，使部分双股解开成单股才能顺利检测。且BrdU为光敏性，因此需要在光线刺激较低（黑暗）的环境下操作，并避光培养。
△ 图例
EdU检测法
EdU原理跟BrdU检测法很像，都是代替胸腺嘧啶（Thymine，T）渗入正在复制的DNA中，并加入能与EdU反应的荧光染料，即可利用检测荧光值侦测细胞增殖，或在细胞组织级别作为标记追踪等研究，实验过程不需要经过BrdU检测法的DNA变性处理。
△ 图例
化学发光细胞活性测定
ATP发光法ATP是细胞的能量直接来源，ATP发光法是通过检测细胞内ATP含量来分析细胞增殖。市面上的原理是利用外源的萤火虫荧光素（Luciferin）与荧光素酶（Luciferase），以细胞内含的ATP为能量来源，发生氧化反应产生生物冷光，因此可通过监测冷光光度，来对应ATP含量并判断细胞增殖状况。
△ 图例
荧光染料增殖实验
CFSE检测法CFSE是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞；当CFSE扩散穿过细胞膜，会与细胞内源酯酶产生水解反应而被激发，发出绿色荧光，这些带荧光的CFSE会进一步与细胞骨架蛋白结合，形成稳定的胞内荧光蛋白。每当细胞进行分裂增殖，胞内荧光蛋白会被平均分配到下一代细胞中，因此细胞荧光强度会随着增殖代数增加而不断地降低，可用流式细胞仪进一步检测分析得出细胞分裂增殖的情况。CFSE的浓度，对于最终判断细胞增殖结果有直接性的影响。
△ 图例
台盼蓝细胞计数
台盼蓝（Trypan Blue）计数法台盼蓝（BI，货号：03-102-1B）是一种蓝色细胞活性染料，无法通过结构完整的细胞膜进入细胞内部；但细胞死后，丧失细胞膜稳定性，台盼蓝会进入细胞将细胞染成蓝色，因此在细胞实验中，常规地搭配自动细胞计数仪或血球计数板，应用于分辨活细胞和死细胞、及检测细胞膜的完整性。
△ 图例
Orangu™细胞计数
Orangu™计数法Orangu™ solution（Cell Guidance，货号：OR01-500）是一种无细胞毒性、高灵敏度、比色法，用于测定细胞增殖和细胞毒性的细胞活性试剂。利用WST-8（细胞代谢的一种水溶性的四唑盐）在细胞内线粒体脱氢酶作为电子介质的情况下，它被还原为橙色的甲瓒染料，且产生甲瓒染料的数量与活细胞的数量和培养时间成正比。操作简单快速，结果可重复。
△ 图例
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