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培养基各自成分作用及培养基的灭菌及使用

2021-12-06     来源:本站     点击次数:3297

培养基(Medium)是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素、色素、激素和血清。不同培养基可根据实际需要,添加一些自身无法合成的化合物,即生长因子。有的培养基还含有抗菌素、色素、激素和血清。
                             



培养基包含 碳水、含氮、无机盐、维生素、水 成分,现介绍它们的各自的作用:
1.NaHCO3的作用是什么?
与二氧化碳一起形成缓冲系统,保持培养基PH值稳定。

2.丙酮酸钠的作用是什么?
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM,-20℃保存,培养基中的终浓度为1mM.

3.加入HEPES有何好处?
培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐,它可提供营养,但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer,加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。HEPES的贮存液浓度一般为1M,常温保存。培养基中的终浓度为25mM,即5ml 1M的HEPES加入到200ml完全培养基中。

4.酚红的作用是什么?
酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。

5.谷氨酰胺的作用是什么?
几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后,可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20℃冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。
试验操作中常配制高浓度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支),分装使用,-20℃保存。使用时,每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml完全培养基中,使其终浓度为2mM培养基。
                            


培养基的灭菌及使用:
1、每次配置时,要注意其生产日期是否在保质期内,查看其开瓶日期及瓶口密封性,保证其未变质,并且未吸潮。
2、培养基配置时,称量要准确,包括盐水的分装要准确。
3、一定要保证现配制现灭菌,未灭菌的配好培养基不能长时间放置,更不可隔夜。
4、灭菌时要保证恒温、恒压,同时要保证有效灭菌时间。
5、灭菌过的培养基要冰箱保存,可保存一周,一般不超过 3 天。而且要遵循“先入先出”原则,先配制的要先使用。
6、在使用时,要根据当班次的使用量,用水浴锅先将培养基溶化为液态,然后及时调低水域温度(先化好的可从水域取出,放在水浴锅锅盖上)待用,千万不可长时间使培养基处于高温状态。
7、做产品微生物检测时,倾倒培养基温度在 45℃左右,不可过烫,避免将菌烫死;也不可过凉,化好的培养基又结块凝固,不便于观察结果。
8、每瓶培养基均要做空白。
9、尽量集中做样,避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞,增大培养基的污染几率,出现误差结果。
10、培养基剩余过少时,可先将其倾倒成空白用板。
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