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艾狄斯25羟基维生素D酶联免疫检测试剂盒操作要点

2010-07-22     来源:广州固康     点击次数:3344

艾狄斯25羟基维生素D酶 联免疫检测试剂盒
(25-OH-VD)检测步骤

         要点和解释
检测前将所有试剂平衡至室温,小心混匀。
 
按照“试剂准备”中所述,复溶或准备相关试剂。
 
1. 准备已作标记的玻璃试管或聚丙烯管用以标准品、质控品和样本的稀释。
 
2. 标准品、质控品和样本各取25μl分别加入到相应标记的试管。
 
3. 所有试管都再加入1ml的25D生物素。用漩涡混合器混合10秒。
 
4. 各取200μl已稀释的标准品、质控品或样本分别加入已包被抗体的相应酶标板微孔内,做双孔。用封口膜密封酶标板,于18-25℃下孵育2小时。
 
5. 用稀释好的洗液洗板3次。
a) 自动洗板:设置洗板机分配每孔至少300μl洗液。注满后抽空,如此循环3次。
b) 手动洗板:迅速颠倒倒出孔内物。每孔加入250μl洗液。再重复洗板2次。
在进入下一步之前,于吸水纸上用力拍打倒置的板以除去多余的洗液 。
 
6. 用多道移液器向所有微孔内加入200μl酶结合物。用封口膜密封酶标板,于18-25℃下孵育30分钟。
 
7. 重复步骤5。
 
8. 用多道移液器向所有微孔内加入200μl TMB底物,用封口膜密封酶标板,于18-25℃下孵育30分钟。
 
 
 
9. 用多道移液器向所有微孔内加入100μ终止液。
 
10. 加入终止液后的30分钟内在酶标仪450nm(参考650nm)波长处测量吸光度。
 
 
  • 置于室温下至少30分钟,直到平衡至室温。
  • 轻轻地反复颠倒混匀。

  • 确保使用前试剂完全复溶。
  • 确保所用试管为硼硅酸盐玻璃试管或聚丙烯管,不能使用聚苯乙烯管因为其可引起结果偏低。
  • 将标准品、质控品和样本直接加入到试管底部,不要粘到侧壁上。
  • 使用移液枪时,沿试管壁加入避免溅出。
  • 充分混匀10秒。
  • 加样时确保不接触到酶标板微孔底部。
  • 加样时不要距离微孔太高,避免溅出。
  • 确保孵育时间刚好。

  • 确保每孔分配合适体积的洗液。
  • 避免微孔内产生气泡。
  • 洗板后快速轻打酶标板以除去残留洗液。

  • 使用多道移液器时确保每个吸嘴吸取的试剂量相同。
  • 使用新的称重盘放置试剂瓶,防止污染。
  • 确保每孔内分配的试剂量准确。
  • 确保每个孔都已密封。
  • 确保孵育时间刚好。
  • TMB底物对光敏感且易受污染。仅移取检测所需要的量,丢弃没用完的TMB底物,请勿再倒回瓶内。
  • 确保酶标仪已设置为正确的波长。.
  • 加入终止液后30分钟内读数。
 

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