『订购信息』
目录号    产品名称    规格
MTO-1009    2×PCR TaqMix（有染料）    1ml
MTO-1010    2×PCR TaqMix（无染料）    1ml
MTQ-1001    2×qPCR TaqMix    1ml
41003    GelRed核酸染料    500ul
31000    20×EvaGreen    1ml
DDLK-010    DIG DNA PCR标记试剂盒    10T
RDLK-010    随机引物法DIG标记试剂盒    10T
DIGD-110    DIG杂交检测试剂盒Ⅰ（NBT/BCIP法）    10T
DIGD-210    DIG杂交检测试剂盒Ⅱ（CDP-Star法）    10T
Hyb-50、Hyb-100    Hyb高效杂交液    50ml、100ml

产品编号：MRN0210

MyLab® 总RNA提取试剂
（适用于动物组织/植物组织、昆虫和细胞）
（Trizol法）
使用说明书

规格    保存    有效期
100ml    2-8℃    12个月
『用途与特点』
1.    本试剂盒可用于几乎所有新鲜或液氮保存的动物和植物组织、昆虫和细胞RNA的快速提取，通用性好。
2.    无须DNA酶、RNA酶抑制剂等。
3.    所需样品量少，并且可根据起始材料的多少自行调整。
4.    操作简便，整个过程<1h。
5.    提取的RNA纯度高，无蛋白质和DNA污染，不需要其它处理立即可用于下游实验如RT-PCR扩增、Northern印迹分析、点印迹杂交、Poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护实验及分子克隆等。
『自备试剂』
异丙醇；无RNase的75%乙醇；DEPC处理H2O；3M醋酸钠；氯仿。
『注意事项』
1.    严防操作环境、使用的容器耗材和试剂的RNase污染。所用器具与耗材进行无RNase处理。操作过程中勤换手套。
2.    过多或过少都有可能影响RNA的质量或产率。若起始材料量很少，RNA预计产量很低，在异丙醇沉淀时，可加入20mg/ml肝糖原溶液0.5~1μl协助RNA沉淀。
3.    将RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收，不要将RNA稀释在蒸馏水或DEPC水中检测OD260。
4.    请勿直接接触皮肤或吞咽，以免灼伤。如接触皮肤应立即用温和的洗涤剂和大量水冲洗。忌用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤程度。如有不适，请马上寻求医生的帮助。
5.    本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。
『操作步骤』
1.    裂解处理：
①    动物/植物组织、昆虫：


25-100 mg液氮冷冻或新鲜的组织，放入存有液氮的研钵里 ，立即研磨至粉状（在研磨过程中研钵内最好始终保持有液氮）。研好后直接向此研钵内加入1ml 总RNA提取试剂，继续研磨成粉状。称取
② 细胞
1）悬浮培养的细胞：
  离心沉淀收集细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞加1ml 总RNA提取试剂。加入总RNA提取试剂前最好不要洗涤细胞，以免增加mRNA降解及RNA酶污染的可能性。
2）贴壁培养的细胞：
直接在培养板中加入总RNA提取试剂裂解细胞，每10cm2面积加1ml 总RNA提取试剂。用取样器吹打几次。
注：总RNA提取试剂的用量根据培养皿的面积决定，而不是由细胞数决定的。如果总RNA提取试剂加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。如果裂解物用枪头吸起来时很粘稠，往往需多加点总RNA提取试剂。
2.  室温放置 5-10min使其充分裂解，至融化成液态后移入无RNase的1.5ml离心管（在研磨成粉状后直到室温融合成液态的过程中不可以再用研磨杵搅动，不然会产生DNA污染）。注：此时可放入-70℃长期保持。
3.  把上述液体移入1.5ml离心管中，并向其中加入200μl氯仿，盖上管盖。剧烈振荡混匀后室温放置5min。注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA 断裂。
4.  4℃ 12,000 rpm 离心 15min。样品分为三层：底层为粉红色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要存在水相中。
5.  小心吸取上层水相至另一离心管中。注：千万不要吸取中间界面。
6.  向离心管中加入等体积的异丙醇和1/10体积 3M的醋酸钠，上下轻柔颠倒混匀，-20℃放置15-20min。
7.  4℃ 14000 rpm离心15min，倒掉上清，注意不要触到沉淀。离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
8.  加入200ul的75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。4℃ 离心2-3min弃上清。尽量弃上清。
9.  把离心管放置于超净台晾至约2-3min（勿完全干燥）。加入30-50μl的无RNase的水。振荡30sec，瞬时离心。
10. 将提取的RNA立即进行下游实验，或放-70℃保存。