概述：呼出气冷凝液（EBC）研究的便携式采集装置

Rtube呼出气凝液采集装置的设计具有易用性；无监督病人在家、在工作场所、在医院、在实验室、在诊所都能方便使用。这种非侵入性的手持设备是完全独立的、一次性的。病人正常呼吸到设备中，Rtube将采集的气息凝结在一个便捷式的可邮寄的容器中。

这一独特的功能使得Rtube很容易地集成到现有的研究中，使得使用者在诊所、医院、家里、工作地点、学校或任何其他合理的环境的大量的EBC数据的采集更加方便。该收集器的易用性和使用环境的灵活性为利用EBC的PH值和其他潜在生物标志物的临床诊断的发展提供了可能。

产品特点：

已使用100000多次，结果可重复、可靠

密封冷凝管能够通过简单的邮件运送以进行集中的样品分析

无需离心机！利用注射器式柱塞作用，即使是最微小的液滴冷凝水，也能将其从冷凝管壁刮入采集到单液池，以进行分析

大的“三通”部分将唾液从呼吸气体中分离，并防止其进入冷凝管

鸭嘴阀/喷嘴提高冷凝效率，并产生高凝析样品量

一次性设计确保随时使用到的都是清洁的设备。没有清洗！

一次性使用设计消除了任何传染病交叉污染的机会

简单的手持设备易于无监督主体在家使用

我们的特殊阀组件是有效的样品采集的关键，并允许无监督主体轻松地收集和存储无污染的样品。在正常的平静潮式呼吸工作下，对于孩子而言，典型的凝液产量为100微升/分钟；对于成人而言，为200微升/分钟

独特的单向阀使得最大粒子镶嵌在冷凝表面，并充当一个柱塞。汇集靠近管的上端的样品的能力允许采样工作在数秒内完成

该Rtube收集系统利用惰性的， FDA批准的聚丙烯材料，使得吸水最小。蓝色单向阀是由美国FDA批准的硅橡胶制成的。医用级塑料密封件的端盖用于长期储存样品。还提供了一个标签，让研究人员或主体记录收集物的名称和日期。每一支Rtube产品都经过严格规范地组装和清理，放置在一个单独的密封袋中，包装的交付给你。为了您的方便，我们提供了一些专业套件以满足广大客户的一些最常见的需求。让我们帮你选择最适合你的需要的Rtube专业工具。

冷却套

冷却套是高效的冷凝液的收集所必需的。通常存储在实验室冰箱直到需要，套管被设计成能轻易地包过Rtube设备，为冷凝液的收集创造完美的条件。每一个冷却套都包含一个绝缘罩。

我们高品质的冷却套都是由固体铝冷加工而成，并为在最苛刻的冻融条件下重复使用而设计。

标准柱塞

由固体铝制成，这是一个独立的设备，利用注射器式柱塞将其内置到Rtube设备中是很有必要的。单向阀能够很容易地沿着聚丙烯壁滑动，并且便于汇集靠近管的上端的样品。

使用说明：

呼出气冷凝技术是一种收集呼出气体样本用以评估一系列疾病参数的非入侵性的采集方法。该Rtube设备的设计目的是为了高效的样本采集效率。呼出的空气通过一个独特的单向阀进入冷却室，呼吸中的蒸气、（气体中的）浮粒和水分沿着Rtube的保护内壁在那里凝聚。之后单向阀用作柱塞收集粘在内壁上的微滴并将样品保存在Rtube顶部附近。

Rtube EBC收集器及配件

Rtube设备被设计为一次性的、单一用途的产品。冷却套、绝缘套和柱塞完全可重复使用。

最关键的特征是Rtube有能力实现冷凝液样本的收集、储存、运输、分析工作在一个Rtube设备内完成。一般不要求将冷凝液转移到其他的设备，最大限度的减小实验室和病人在家使用的复杂度。几乎消除了样品受到污染的机会，并且使得样品处理所需的劳动量最小化。每一个步骤都经过精心设计以减少 病人、研究人员以及实验室技术人员的工作量和工作的复杂度。该系统的设计使得其即使是在非常大的临床研究中也是方便使用的。

在正常的平静潮式呼吸工作下，对于孩子而言，典型的凝液产量为75-150微升/分钟；对于成人而言，为100-250微升/分钟。正常呼吸2分钟的凝液产量足以满足大多数的实验室测试需要。然而常用的采集时间是7-10分钟，以便将额外的样品冷藏起来用于其他的研究。

这些样品可以在无人监督的情况下在受试者的家里或在工地很容易地收集起来，然后合理地将样品提供给相关机构用于职业病学和毒理学研究。另外，根据最近FDA的要求，认为对气道炎症的客观测量，如那些在呼出气冷凝液中发现的样本数据，对于旨在衡量消炎药的疗效的临床研究具有重要意义。

典型的5步收集过程如下所示，为了清楚起见省略了一些细节，请阅读本手册的最后关于注意事项和常规检测信息的部分。

以下对5个步骤分别进行详细说明：

注意：患者在EBC收集前的一小时内不能吃或喝任何东西

步骤1：使用Rtube凝结呼出的气息

步骤2：存储/运输冷凝液

步骤3：使用柱塞使呼出气凝液汇聚在Rtube顶部进行收集

步骤4：（可选）除去二氧化碳（用于PH值测量）

步骤5：分析样品

1.2准备Rtube设备

   该Rtube设备在大多数的应用领域，可直接使用。但是，如果研究的呼出气凝液中的化合物可能同时是在实验室环境中的污染物，应采取额外的预防措施，这些包括但不限于硝酸盐和亚硝酸盐。我们建议您使用达到或超过ASTM D 1193 规范Ⅰ型或Ⅱ型试剂级的超纯去离子水清洗冷凝室，并使得他们在使用前彻底干燥以消除任何可能的污染。

1.3填写位于收集管的一边的标签，并注意位于标签上的红色箭头的位置，应该在收集的过程中朝上。

1.4将蓝色的绝缘罩放置在铝冷却套上，以便保护你的手，并保持铝冷却套低温。

1.5将铝套放置在收集箱外

1.6患者应立即通过红色箭头指向向上的吹嘴开始呼吸。在某些情况下，患者会有一个很浅的呼吸模式，应鼓励患者努力呼气直到能“听到自己的呼吸声流过Rtube设备的顶部”。单向阀将通过冷却套筒将呼出的空气直接引导到样品收集的地方。经过长时间的贮存，在尝试初次的呼气时，Rtube设备可能呈现出一些阻力；这是正常现象，并且通过预验证程序很容易在这里纠正。

1.7在Rtube设备的适用中收集的时间应标准化；在大多数应用情况中，我们建议收集时间定为5-7分钟。

1.8当样品收集工作完成并做好适当保存，患者应将吹嘴处理掉并将冷却套放回保护袋冻结。

步骤2：储存/运输凝析液

2.1拆下吹嘴并丢弃，将Rtube对着蓝色鸭嘴阀的端口或红色箭头的一端用封盖盖上。另一端也可以盖上。我们可以根据客户需求提供额外数量的封盖，详情可电话咨询。               

2.2将样品在适当的温度下冷冻；如果所研究的化合物适合，也可在室温条件下放置。在研究性质稳定的化合物时，可在室温或在家/实验室冷冻室里储存，直至需要。如果包装得当并且远离高温，样品可通过邮件邮寄，样品液不会受到任何污染和损失。事实上，Rtube设备是如此的简单易用，无监督主体应该能够从他们的医院病床上、在他们的工作场所或者从他们自己舒适的家里完成所有的采样工作。当研究常见的实验室污染物时，应尽快将样品从收集器中取出并储存在冷冻柜里。

2.3 在解冻之前，一定要拆下较低一端的（与红色箭头指向相反的一端）封盖。只要拆下较低一端的封盖，Rtube设备得以泄压，确保解冻过程中样品得到保护。保持上端的封盖一直塞着直至样品完全解冻，并准备进行分析。

步骤3：利用柱塞收集汇聚于Rtube设备顶部的呼吸气凝液

3.1 在实验室里，取下封盖，用单向鸭嘴阀朝着管子的顶部塞，使得样品凝结于Rtube顶部，更便于收集。简单地将Rtube放置于超过标准柱塞顶部的位置并向下推直至Rtube触及标准柱塞的底部。确保在这个过程中，红色箭头标记始终是指向上的。随着Rtube被向下推在柱塞上，柱塞末端的突出部分与鸭嘴阀相接触，冷凝表面的整个长度很像一个注射器。其结果是一个整洁的0.5ml-1.5ml的纯呼出气冷凝液池，用于分析研究。

3.2 注射器式柱塞使凝液汇聚于Rtube顶部，使得样品采集变得简单。

步骤4：（可选）除去二氧化碳（PH值测量所需）

我们目前正在修改我们的PH排气柱塞并且我们将很快为Rtube设备提供一个用于排气封附件。当我们的客户需要除去样品中气体的临时解决途径时，请参考下方列出的简单操作。（详情也可电话咨询）。

4.1你将需要一个无二氧化碳气体的资源。我们推荐氩气，但氧气和氮气也是适合的。你还需要一个用于检测非常稀的液体的微型PH探针、一个水箱调节器、一个装管和巴斯德玻璃吸液管。

4.2呼出气冷凝液的样品在1.5ml的微量离心管中以150ul等分

4.3将装管的一端与水箱调节器相连，另一端与玻璃管连接起来

4.4打开氩气流（渐渐地）

4.5慢慢地把吸管插入样品，通过调节水箱的流量直至样品以稳定的速度起泡，以防止样品冒泡溢出微量离心管

4.6从样品中除去氩气管，但留下一个温和的氩气流过样品的顶部。这很温和的流量将有助于阻止周围的二氧化碳再次进入样本。但会随之一起快速移动。将微探针插入样品，等待样品的PH值稳定。不要将PH电极对着微量离心管的底部，因为这样可能会影响到PH值读数的精确性。我们建议将电极的尖端提起到呼出气冷凝液样品的中央，然后再记录PH值。

步骤5：分析样品

5.1这一步当然取决于你所感兴趣的物质。这个物质可能是不稳定的，需要快速分析，或者该物质也可能是非常稳定的（如PH值的情况），可在任何时候进行分析。

Rtube被设计成一次性的、单一使用的物品。冷却套、绝缘套和柱塞完全可重复使用。

最关键的特征是Rtube有能力实现冷凝液样本的收集、储存、运输、分析工作在一个Rtube设备内完成。一般不要求将冷凝液转移到其他的设备，最大限度的减小实验室和病人在家使用的复杂度。几乎消除了样品受到污染的机会，并且使得样品处理所需的劳动量最小化。每一个步骤都经过精心设计以减少 病人、研究人员以及实验室技术人员的工作量和工作的复杂度。该系统的设计使得其即使是在非常大的临床研究中也是方便使用的。

Rtube的使用准备

1. 除去包装并将端盖放在一边
2. 向下看rtube的顶部，注意顶端的鸭嘴阀的方位
3. 用拇指和食指握住Rtube，这样使得阀的顶部与你的手指处在一条线上。注意阀顶端方位的变化。相应地调整手指的位置并轻轻地挤压Rtube
4. 挤压蓝色鸭嘴阀并验证其是否伸缩。这可打破其在存储期间可能形成的任何轻微的粘连，并使得阀能够自由地打开
5. Rtube现在做好了使用准备。紧密地监视研究对象(病人)；如果他/她呼气无法通过设备，请丢弃该Rtube。

信息：PH值检测指南

PH测定收集：呼出气冷凝液可以常规方法收集。收集系统的特别准备工作并不是必要的，尽管专用设备可能是有效的（见下文）。每分钟通气量并不影响除氧的呼出气冷凝液的PH值，虽然PH测量值可能与是否除氧相关。我们建议将冷却套储存在-18℃到10℃之间的采集温度，直到立即使用之前。请注意：过滤器的选用并不影响PH值的测量。

我们建议PH值测量前除氧。氩（约300毫升/分钟），通入约200-600微升到呼出气冷凝液，大约8分钟，一般得到的是令人满意的完全稳定的PH值。我们甚至建议在除氧过程中或之后，特别是呼出气冷凝液还在氩中时，立即测量PH值。氩气比空气重，所以往往用作防止快速从大气中吸收二氧化碳的防护罩（二氧化碳会使得呼出气冷凝液酸化）。除氧测量有助于确保读数的稳定性。注意当呼出气冷凝液PH值在除氧前小于5.5左右，在除氧过程中是不大可能改变很多的。当PH值为6.5以上，除氧将可能引起PH值大幅上升，进入到从中到高再到7的PH值范围。就所有对呼出气冷凝液的检测来说，我们对什么接触到了样品非常谨慎，尽管PH值是稳定的，似乎并没有受到实验室错误的严重影响。

注意：如果你想使用一个非除氧的样品通过呼出气冷凝液研究多种生物标志物；在对样品进行除氧并测量PH值之前，简单的将呼出气冷凝液等分到一个微型离心管。

测PH需要的储存：不需要特殊条件。我们用Rtube或Phtube本身来存储所有样品（两者都是由聚丙烯、聚四氟乙烯、硅橡胶构成），或者存储在聚丙烯离心管直到进行检测。我们倾向于将样品冷冻在-20℃~-80℃之间，但是已发现有样品在室温下存储多年后进行PH检测，能呈现出卓越的可重复性。

信息：氨的测定指南

氨测定：大部分被困在呼出气冷凝液的氨来自上呼吸道。我们相信急性哮喘患者的呼出气冷凝液中的氨含量如此低的原因是因为患者本人的通气道衬液酸化，因此俘获氨（或许促进扩散进入血液）。氨作为一个非常敏感和容易衡量的呼出气冷凝液指标，但在健康的受试者身上有着显著的变化。（然而急性哮喘患者的变化最小，所有急性哮喘患者的氨值都非常低，甚至检测不到氨水平）目前还没有与呼出气冷凝液中氨的稳定性相关的严谨的研究案例，但是广泛的实践经验表明，呼出气凝液中的氨浓度在室温下至少能稳定保存数周，在-20℃的情况下能稳定保存数年。呼出气凝液中的氨浓度在除氧过程中会上升几个百分比，可能是因为水分从呼出气冷凝液中蒸发的缘故。氨具有一个潜在的优势，它可以在未经处理的样品中用简单的商用比色试纸被测量。该测量完全可以由个体主体在家完成，但是，在实验室，我们使用一种来自Sigma的商业的光谱光度氨测量设备。我们已经修改了这一商业分析，使得测量的速度更快，使用的样品和试剂更少。我们可以按要求提供该修改的说明。

信息：硝酸盐和亚硝酸盐的测定指南

硝酸盐和亚硝酸盐的收集：当研究硝酸盐或亚硝酸盐离子时，呼出气冷凝液的收集、存储和分析需要用到严谨的技术。硝酸盐和亚硝酸盐是无处不在的实验室污染物，每一处潮湿的地表都有携带。人的指尖这些离子也非常丰富。通过覆盖保护实验室表面是不够的，因为硝酸盐和亚硝酸盐由一氧化氮（NO）氧化形成，并且几乎在所有的实验室和诊所、尤其是呼吸门诊，都有一定浓度的存在。NO也能穿过塑料覆盖物。在乳胶手套的表面可能有非常高水平的氮氧化物。微型离心管和其他检测管总是被氮氧化物大大污染。

对我们来说从收集系统和存储容器中消除呼出气冷凝液里的一些氮氧化物污染似乎非常困难。这是一个重要的问题，特别是亚硝酸盐，因为亚硝酸盐是在低到亚微摩尔的范围内在呼出气凝液里被发现的，因此，虽然污染不可避免，但是可以从主体覆盖该信号。此外，亚硝酸盐在水溶液中会氧化成硝酸盐（例如，使用过氧化氢作为氧化剂）或转化为NO（通过质子化并在分解亚硝酸过程中不释放）。这些过程可以降低样品在存储过程中的亚硝酸盐的水平。

由于这些问题，我们提出以下建议，关于呼出气凝液收集中的氮氧化物：

1. 注意不要让手指碰到任何会与呼出气凝液接触的表面。这包括离心管端盖的内侧（一个经常被忽略的容易被污染的部位）和Rtube设备端盖的内侧。在处理任何可能与冷凝物接触的表面时，我们建议您戴上手套，然后用去离子水冲洗戴着手套的手。更可取地，使用经过制造商预冲洗并含有低萃取离子的手套，这些手套通过研究供应目录已随时可得。
2. 我们强烈主张在使用前尽快用蒸馏水或者去离子水冲洗Rtube设备，如果你正在计划对氮氧化物进行检测。一个简单的冲洗，消除了几乎所有可能从环境污染中呈现的亚硝酸盐和硝酸盐。我们有一个可行的冲洗和干燥Rtube接触冷凝液的组件的有效方法。详情请联系我们。
3. 研究氮氧化物时，我们建议完成收集后尽快塞住Rtube并移除呼出气凝液样品（最好在数小时之内），并且将呼出气凝液样品放置在经去离子水预冲洗再经空气强制干燥的聚丙烯离心管内。

• 我们建议采集完成后尽快对亚硝酸盐进行检测。质子化会造成亚硝酸盐的损失，使得呼出气凝液发生最积极的酸化反应（比如已发现的急性哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺病、支气管扩张以及普通感冒后不久）。因此，亚硝酸盐会从呼出气凝液中快速损失（几天之内），也就是病人最不舒服的时候。此外，亚硝酸盐初始含量越高，亚硝酸盐损失也越快。鉴于患病病人的呼出气凝液中的亚硝酸盐含量是最高的——同时呼出气凝液的PH值是最低的，如果不立即进行检测，在这些患者中可能看到的实质性差异往往是不确定的。

• 硝酸盐通常被作为总氮氧化物 (NOx)测量。我们首先要求，为使得氮氧化物的检测结果更清楚，报告为总氮氧化物或硝酸盐+亚硝酸盐，或硝酸盐的本身。硝酸盐在储存过程中不会出现不稳定的情况，虽然在储存过程中，硝酸盐水平会随着亚硝酸盐的氧化而轻微升高。
• 半胱氨酰白三烯测定指南
• ：我们没有确定任何特殊的收集关注，如果你研究的对象是胱氨酸。然而，反复冷冻解冻会降低胱氨酸稳定性的可能性是存在的，但这也不是十分确定。如果这是一个问题，然后在0℃或更高的气温下收集呼出气凝液能优化其稳定，就像在0℃以下一样。没有空气流动的情况下，呼出气凝液将会被冷凝器不断地冻结，在呼出温暖的空气穿过冷凝器期间解冻。我们并没有严格地研究这些问题。

• ：这个试验的困难，我们相信，是大多数人使用的商业用酶联免疫吸附试验中存在的准确性和重复性的问题。最近，半胱氨酰白三烯的检测标准似乎被提高了，质谱检测提供了一个更准确的，但不太常用的方法，可用以证实酶联免疫吸附试验的结果。我们紧跟着最近的趋势来报告这些酶联免疫吸附试验的结果为“半胱氨酰白三烯样免疫反应”，接受酶联免疫吸附测定可能不对在呼出气凝液检测中具有高的特异性。