一、活肿瘤组织冻存复苏技术简介

上海赛立维生物科技公司通过自主研发和技术创新，推出了活肿瘤组织冻存复苏试剂盒（LiveTissue），成功突破了活肿瘤组织保存难题。应用该技术冻存的肿瘤组织可长期保持肿瘤组织活性，组织复苏后可维持与新鲜肿瘤组织几乎相同的形态特征和功能活性。该技术的具体特点包括：

1. 冻存后可长期保存（>10年）。
2. 复苏后形态功能与新鲜组织一致。
3. 复苏后仍可分离原代肿瘤细胞。
4. 冻存前后PDX成瘤能力基本不变。
5. 可替代冰冻切片和石蜡固定组织。
6. 实现DNA、RNA和蛋白活性保存。
7. 手术标本、活检组织均适用。

二、活肿瘤组织个性化样本保存一站式服务

LiveTissue活肿瘤组织冻存复苏试剂盒操作简便、易于掌握，但由于需要液氮操作和保存，其广泛应用受到一定限制。为了让更多肿瘤医生、患者和研究人员及时保存珍贵的活肿瘤样本，赛立维公司推出了“活肿瘤组织个性化样本保存一站式服务”，具体服务内容和流程如下：

1. 活肿瘤组织样本冻存服务

1. 活肿瘤组织采集：用户采集新鲜肿瘤样本（最好不小于0.5cm×0.5cm），移入专用的运送保存液中（本公司提供），置于冰上或4℃存放。
2. 标本收取和运送：由指定的冷链运输公司上门收取标本，在指定时间段送达本公司（样本采集至送达本公司应小于12小时）。
3. 活肿瘤组织冻存：本公司收到标本后立即采用LiveTissue试剂盒进行标准化冻存和信息录入。
4. 活肿瘤组织保存和管理：冻存后的活肿瘤组织存放于本公司专用液氮罐中。样本数量、存放位置、冻存时间、复苏时间、使用效果等相关信息均有详细的电子化管理记录。

1. 活肿瘤组织样本复苏服务

1. 活肿瘤组织样本复苏方式：根据用户要求和用途，可选择用户自己复苏，或由公司代为复苏。
2. 用户自己复苏：由指定的冷链运输公司，采用液氮运输方式，将冻存样本直接送达用户手中。
3. 公司复苏服务：由本公司根据样本用途进行专业复苏和后续服务（见下）。

1. 活肿瘤组织应用服务

1. 形态学分析：将复苏组织进行冰冻切片或石蜡切片分析，包括常规HE染色，免疫荧光检测和免疫组化分析等。
2. 基因测序和分析：由本公司长期合作的专业测序公司进行样本的DNA、RNA提取和基因测序，并根据用户要求完成相应的生物信息学分析。
3. 原代肿瘤细胞分离：肿瘤组织复苏后，由本公司技术人员采用美天旎公司的GentleMACS设备分离活肿瘤细胞，并可根据用户需求完成可行的后续实验。
4. PDX模型构建：本公司采用NOS-SCID小鼠构建PDX模型，可根据用户要求复苏特定数量的肿瘤组织接种小鼠，成瘤后可在小鼠体内进行传代。
5. 肿瘤组织薄层切片培养和药敏试验：本服务是我公司独有的服务项目，为肿瘤精准化疗提供参考。肿瘤复苏后，采用专用的活组织切片机，将肿瘤切成0.2-0.3mm的薄层切片，置于特殊的培养支架上培养，可加入特定的化疗药物或靶向药物处理特定时间，然后选择采用CCK-8检测、EDU掺入、Live/Dead荧光、Caspase3剪切体免疫组化或Tunel凋亡染色等技术和方法显示和评价药物的作用效果。

三、注意事项

1. 肿瘤组织冻存复苏后，其细胞活性相比新鲜组织会下降20-30%左右，但存活的肿瘤细胞已可基本满足上述实验需要。
2. 不同的肿瘤组织制备PDX模型的成瘤率有较大差异，冻存复苏后的肿瘤组织也存在类似现象，成瘤情况与新鲜肿瘤组织基本一致。
3. 复苏组织若要分离原代肿瘤细胞，需在冻存时提供足够体积（直径>1cm）的肿瘤组织，以保证活肿瘤细胞分离效果和数量。
4. 肿瘤组织薄层切片培养的优点：与传统的原代肿瘤细胞或肿瘤组织球比较，这两种方法均需要对肿瘤组织进行细胞分离，一方面体积较小的肿瘤无法获得足够的细胞进行研究，另一方面由于分离的肿瘤细胞脱离了肿瘤组织微环境，其测试的结果也往往不能真实反映肿瘤对药物的敏感性。我们采用0.2-0.3毫米的薄层肿瘤组织切片培养，需要的组织体积较小，在保持肿瘤组织结构完整的前提下，可充分保证其在培养基中对营养的吸收和物质交换。在优化的培养基和特殊的支持物上，肿瘤组织切片可存活7天以上，完全可满足体外药物筛查的要求，并真实高效的反映肿瘤对药物的敏感性。我们的前期研究标明，冻存复苏的肿瘤组织可保留新鲜组织70-80%的活性，经体外肿瘤组织薄层切片培养测试，与新鲜肿瘤组织切片具有完全相同的药物反应性，可为肿瘤复发和转移患者提供实时的肿瘤药物敏感性测试。