软琼脂法实验是评估细胞（尤其是肿瘤细胞）锚定非依赖性生长能力的关键技术，常用于检测细胞转化、致瘤性或克隆形成能力。其实验周期和流程因具体服务提供方和研究目的而略有差异，但核心步骤可综合如下：
 
一、实验周期
 
1、细胞培养阶段
 
预处理与接种：细胞需处于对数生长期，调整密度至300-1000活细胞/ml悬液，并进行活力检测。
 
软琼脂培养：细胞在软琼脂中培养的时间通常为2-4周。其中，克隆形成需6-8天，而完整的实验周期（从接种到结果分析）可能长达21-28天。
 
2、结果分析阶段
 
克隆形成后，需通过染色（如结晶紫）和显微镜计数，结合图像分析系统生成报告，通常需额外3-5天。
 
总周期：约3-5周（含细胞准备、培养及数据分析）。
 
二、实验流程
 
1、样本准备与处理
 
细胞来源：客户可自行提供或由服务方代购制备。
 
细胞悬液制备：调整细胞密度至适宜范围，确保悬液均匀无聚集。
 
2、琼脂制备
 
底层琼脂：通常使用5%琼脂与培养基混合，高温融化后铺于培养板底部，避免气泡并冷却凝固。
 
上层琼脂：将细胞悬液与液态琼脂（50℃左右）快速混合，覆盖于底层琼脂上，注意温度控制以防细胞热损伤。
 
3、培养与观察
 
培养条件：置于37℃、5% CO₂环境中持续培养，定期检查琼脂湿度（如垫湿润滤纸防干裂）。
 
克隆形成：6-8天后可见克隆子，2-3周后克隆充分生长。
 
4、结果分析
 
克隆染色与计数：溶解琼脂后，通过染色法（如台盼蓝、结晶紫）标记活细胞，显微镜下统计含50个以上细胞的克隆数。
 
数据报告：提供图像、克隆形成率计算及实验参数（如培养基成分、细胞密度）的详细报告。
 
三、关键注意事项
 
琼脂状态控制：需保持液态（>80℃）以避免凝固不均，混合时按顺序操作（先琼脂、后培养基、最后细胞悬液）。
 
污染与蒸发：培养环境需严格无菌，使用多层湿润滤纸维持湿度，防止琼脂干裂。
 
对照组设置：如加入DMSO作为实验组，空白对照组用于排除背景干扰。
 
四、服务选择与报价
 
服务内容：部分公司提供全流程服务，涵盖细胞制备、实验操作及报告生成。
 
定制化需求：可根据客户要求调整参数（如琼脂浓度、检测方法）。
 
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