细胞的复苏与传代

  随着近20年基因学的发展，原代细胞越来越被科学界所重视，因为原代细胞刚从组织中分离，生物学特性未发生很大变化，仍保留原来的遗传特性，也是最接近和反映体内生长特性，基因保留量高，适宜用于科学研究。

  原代细胞的培养也叫从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。

  北京裕恒丰科技有限公司作为美国ScienCell品牌的一级代理商，首次将ScienCell实验室高质量的原代细胞及配套培养基引进到国内，为科学界提供最优质的细胞产品。

  下面就来讲解一下ScienCell 原代细胞的复苏与传代

1.原代细胞的复苏与冻存      

我们的原则是：慢冻快融

（1）细胞的复苏：从液氮中取出冷冻管，迅速投入到37℃水浴中，使其快速解冻，轻摇冷冻管使其在一分钟内全部融化，移入到无菌操作台内，请注意我们的原代细胞不需要离心；

（2）细胞的冻存：取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10^6—5×10^6细胞/ml），一支细胞冻存管放1ml细胞，密封好后写好名称和时间，标准的冻存方法是4℃ 30min，-20℃ 30min，-85℃ 1-2天，液氮长期保存。

2.细胞的培养

（1）包被：ScienCell的原代细胞是贴壁生长，建议用培养基预先包被，您可以选购ScienCell的专用包被液，包被浓度一般是2ug/cm2，37℃放置1h或者4℃过夜，注意包被好的培养瓶不能放置超过24小时；

（2）配置培养基：ScienCell为每一种原代细胞良好生长研发了的专用培养基，仅需要把胎牛血清、生长因子和双抗直接加入到培养基中混匀就可以直接使用，操作简单快捷；

（3）细胞的培养：先把培养瓶中的包被液吸出，灭菌双蒸水洗涤2遍，加入10ml混匀好的培养基，把复苏好的原代细胞加入到培养瓶中，并另用1ml培养基涮洗细胞瓶，保证细胞都被加入到培养瓶中，放入培养箱中静置培养，12-16小时后更换培养液，每隔一天更换一次培养液，大概3天左右细胞就培养好。

3.细胞的传代

  细胞生长至70-80%左右可以传代，传代比例1:2或1:3为佳。

（1）弃去培养液，PBS洗涤培养瓶2遍，加入胰酶消化液1ml，37度孵育4分钟左右，轻拍培养瓶侧面，显微镜下观察细胞消化情况；

（2）细胞消化好后，加入4-5ml中和液中和胰酶，将细胞液离心，吸出上清，加入1-2ml培养基重新悬浮细胞，加入到包被好的培养瓶中，瓶中已有10ml培养基，每两天更换培养基；

  如果您对于原代细胞的复苏和培养有任何的疑问，可以致电我公司，我公司有专人为您服务！

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