优势服务-原代培养技术应用实例（一）

也叫初代培养是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。原代细胞最接近和最能反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。

方法

1. 组织块培养法

将剪成的小组织团块接种于培养瓶（或皿）中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

2. 消化培养法

把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，由块状变成絮状，再采用机械法使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

3. 悬浮细胞培养法

可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

4. 器官培养

取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养。

操作

应用实例

一、大鼠神经元细胞（酶消化法）

简述：新生24h或E18胎鼠，取脑，剥离海马，剪碎，木瓜酶消化，清洗过筛后铺于多聚赖氨酸包被的培养板中。

二、大鼠雪旺细胞（植块法）

简述：新生24h大鼠，取坐骨神经，剥去外膜和束膜，剪成1mm3的小块，均匀铺于培养皿内，加少量血清，37℃ CO2培养2h后，再加入培养基，24-48h后有细胞爬出。

三、大鼠胰岛（酶消化加密度梯度离心）

简述：将SD大鼠取下胰腺，水浴消化后过滤，终止消化；离心后洗涤两次；沉淀物加25%Ficoll混匀，其上依次分别加入23%、20%、11%Ficoll溶液和Hank’s液，离心后吸出23%-20% 及20%-11%界面的胰岛，用Hank’s液洗涤离心共三次。

四、大鼠心脏窦房结细胞（酶消化法）

简述：将几只新生大鼠心脏窦房结集中，剪碎用II型胶原酶消化20-30分钟，期间吹打数次，收集细胞加入PBS离心，弃上清清洗，沉淀中加入含血清的DMEM高糖培养基，重悬细胞，铺板，培养90分钟后，将未贴壁的细胞转移至新的培养皿中，继续培养，每天换液一次。

五、大鼠关节滑膜间质细胞（酶消化法）

简述：大鼠麻醉后取出滑膜组织，浸泡于含双抗的H-DMEM中，低温下转移至超净工作台。用含双抗的PBS冲洗3次，将其剪成约1mm3大小。加入Ⅰ型胶原酶进行消化，待絮状物大部分消失后，过滤并吸取滤过液，离心5 min弃上清液，洗涤3次，接种于六孔板中，用含血清的H-DMEM高糖培养基进行培养。

实验方法仅供参考交流。图片为钰森实验平台实验员实拍，版权所有。

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