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如何清洁移液器以减少移液污染造成的PCR检测假阳性风险

2020-03-03     来源:本站     点击次数:729

对于大量进行PCR的实验室来说,移液器的污染造成的假阳性并不是一个罕见的情况。
 
PCR尤其是RT-PCR技术已经逐渐成为疾病诊断的标准方法。如近期流行的新冠(COVID-19)疫情,RT-PCR结果即为诊断标准之一。对于PCR检测,由于实验室设备的污染造成的假阳性结果也不容忽视。尤其是在样本量极大,PCR仪连续工作期间,检测间往往都是封闭环境,气溶胶弥漫,仪器极易污染。而移液器往往是离样品最近,使用最频繁的仪器,不论是吸液过程中,还是在操作环境中,都非常容易被污染。污染的移液器可能会将污染的样品或核酸引入后续样品或者PCR反应体系中导致检出信号而出现假阳性结果。
 
我们以德国BRAND 的Transferpette® S移液器为例,介绍如何清洁移液器以减少移液器污染造成的假阳性风险。德国BRAND 的Transferpette® S移液器具有易于拆卸维护的优点,配件更换容易,并具有易校准技术,无需工具即可进行移液器校准。并且Transferpette® S移液器可以整支121 oC高压灭菌,尤其适合用于PCR实验。
 
 
移液器污染容易造成PCR实验假阳性风险的部分主要为下半支,污染分为两个类型:1. 机身外部的污染。通常由于离心,震荡,或者PCR加热造成气溶胶弥漫在实验环境中,沾染在机身外侧。或者在操作时如果不小心机身外侧接触了离心管的内壁,可能会造成移液器污染。在后续实验中可能不小心触碰样品管,离心管等可能会造成假阳性风险。2. 吸液时倒吸或者吸液的气溶胶污染。如果操作样品时未使用滤芯吸头,并且发生误操作,致使样品倒吸入移液器,没有及时清理,可能会污染后面的样品造成假阳性风险。吸液时气溶胶的污染也不可小觑,以20 μl移液器为例,在室温20 oC, 相对湿度为约60% RH时,吸液时的蒸发率可达到0.046 μl/s,相当于每秒蒸发0.23%的总移液体积。这种情况下如果没有使用滤芯吸头,不可避免蒸发的液体裹挟着样品会进入移液器下半支,并在后续的操作中吹入后续的样品中造成假阳性风险。
 
发生倒吸或者误碰样品管内壁后立刻停止操作进行清洁。气溶胶的污染可以通过定时清洁来减少。
 
接下来介绍如何拆卸与清洁德国BRAND 的Transferpette® S移液器:
第一步,使用75%乙醇或异丙醇擦拭移液器外表面进行基础清洁与消毒
 
 
第二步,旋转下半支卸下下半支,通过旋转拆出活塞(I),弹簧密封圈(II),吸头锥套筒(III),以及弹吸头套筒(IV)。
 
 
 
第三步,所有部件置于75%乙醇或者异丙醇中浸泡30分钟。取出用去离子水冲干净。
 
 
第四步,将所有部件置于含有去垢剂的超声波洗涤仪内超声清洁10分钟,取出用去离子水冲干净。
 
 
第五步,视核酸污染情况严重程度,吸头锥套筒,活塞等配件可置于甘氨酸-盐酸缓冲液(pH约2.0)中浸泡过夜。取出后用去离子水冲洗干净。甘氨酸-盐酸缓冲液配置方法:取30.6 g NaCl,39.2 g 甘氨酸,加去离子水定容至523 ml,加1 N HCl 477 ml,配置成10 x缓冲液。使用时按1:10稀释。严重污染的密封圈应更换。
 
第六步,部件晾干后,为活塞与密封圈涂上原装硅油。
 
 
第七步,按照第二步相反的方向旋转安装上移液器即可。
 
对于具有感染性污染的移液器,为了人员安全,操作全程应佩戴如手套、口罩、护目镜等防护用品,超声时应盖上盖子,并在超声清洁后将移液器于灭菌锅中121oC 灭菌20分钟,再进行后续清洁。有时会为了减少感染风险,将高温灭菌操作为第一步进行,注意移液器机身内外如有倒吸凝结的污垢,未清洁的高温灭菌操作可能不能实现完全消毒,并可能损坏移液器。

最后须强调,做PCR检测实验时推荐使用BRAND预装灭菌滤芯吸头,可避免人工装吸头引入污染的风险,以及避免操作样品时吸入气溶胶造成假阳性的风险。
 
 
德国BRAND简介:BRAND GMBH + CO KG是德国玻璃与塑料体积量具与移液设备的领导品牌,自1998年起被授予德国计量校准服务(DKD,现更名为DAkks)资质。在移液与生命科学耗材上有几十年的生产与技术经验。如果对于BRAND感兴趣,可以联络BRAND中国子公司普兰德(上海)贸易有限公司。联系方式:021-64222318,或者info@brand.cn.com.