Q1：HPLC方法开发中最大的挑战是什么？

A1：最大的挑战有两个。第一是化合物之间的分离度问题，色谱分析的前提是分离，只有充分分离才能精确地定量（使用MS作为检测器时对于非同分异构体等情况例外）；第二是分析物色谱峰的峰形，当峰形不佳的时候（可以用拖尾因子、柱效等来衡量），也会影响分析物的定量和分离。

Q2：有哪些方法可以解决分离度的问题？

A2：1990年研究人员对这个问题进行了系统的研究，认为分离度Rs主要由三个因素决定，也就是柱效N，选择性α和保留因子k（如下图）。这些年来的很多技术革新都是通过提高N来提高分离度，比如设计了核壳硅胶作为色谱柱填料基质或者用UPLC仪器搭配小粒径（亚2 μm）颗粒填料。但更根本和有效的途径是通过改变选择性来实现分离，也就是改变难分离的化合物与固定相和流动相之间的作用力，从下图中也可以看到，通过改变选择性可以有效改善分离度。

Q3：有哪些方法可以改变选择性？

A3：改变选择性的方法同样很多。最重要的就是从三个角度出发：分析物本身、流动相以及固定相。对于可离子化的分析物，根据化合物的pKa针对性地改变流动相pH可以有效改变选择性；另外，由于常用的溶剂（正相中的乙醇、异丙醇，反相中的甲醇、乙腈）之间的在氢键、极性作用等的差异比较大，因此改变流动相时常常也会有效改善选择性；另外，可以根据难分离的化合物之间的差异，针对性地选择可以识别这些差异的色谱柱，比如π-π作用、氢键作用、偶极-偶极作用、疏水作用、离子交换作用、形状选择性等，通过选择合适的色谱柱往往也能达到出奇制胜的效果。

Q4：峰形问题有哪些原因和解决办法？

A4：解决峰形问题最关键的是找对原因。造成峰形问题的原因有很多，但是大部分是化合物本身的原因，比如含有与固定相产生强作用的基团（如含N的碱性基团、螯合基团等），或者含有在某些流动相条件下会互变的基团等。至于解决办法，就需要对症下药，比如对于前者就需要在流动相中加入添加剂或者选择更“惰性”的柱子，对于后者就需要选择更合适的流动相条件。

Q5：星谱科技所提供的色谱柱有哪些优势？

A5：星谱科技目前主要提供英国Horizon公司的色谱柱，这些色谱柱的主要优势有三个：第一，它的多款色谱柱具有独特的选择性，在解决分离度问题方面很有优势，比如C18/AR、C18/PFP和amide 18等复合型固定相设计，可以在保留C18疏水性的基础上引入比如π-π作用、氢键作用、偶极-偶极作用等；第二，几乎所有的这些键合固定相都有核壳硅胶基质类型填料可供选择，保证在好的选择性的同时具有高柱效，从而获得更好的分离度；第三，Horizon色谱柱选择的硅胶都是超纯、超惰性的硅胶，可以尽量降低因分析物和硅胶表面的作用而造成的峰形问题。总结来说，Horizon色谱柱是解决色谱分析中分离度和峰形问题的利器。同时，星谱科技的技术人员对色谱柱也有深刻的理解，因此可以根据用户的具体项目需要更精准地推荐色谱柱，节约方法开发的时间。