操作步骤：
1、准备工作
A、 玻璃匀浆器、75℅乙醇预冷 ，离心机预冷至4℃ 打开超净工作台紫外灯15分钟以上
B、 用酒精擦拭台面 EP管标记

2、匀浆处理
1、取一定量的纯化过的孢子悬浮液，12000rpm ，离心5min，弃上清
a 、或者用匀浆仪进行匀浆处理，悬浮液不经离心，直接加0.5ml Trizol reagent于冰上充分匀浆悬浮液样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.，然后再加入0.5ml Trizol 冲洗匀浆器，转移至1.5ml EP管中
b、 直接在悬浮液中加入Trizol裂解细胞，加1ml Trizol.用取样器吹打几次.（离心取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。加Trizol前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理）

2、1ml Trizol Reagent，震荡混匀

3、将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。

4、可选步骤:4 ℃ 12 000rpm离心10min，取上清。
如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。

5、每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，在漩涡振荡器上震荡15s，室温放置3min。如不能涡旋混匀，可手动颠倒混匀2min代替。

6、4 ℃ 12 000rpm，离心10-15min，样品会分成三层：红色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（约600ul，约为所用Trizol试剂的60%）转移到新管中。（如要分离蛋白质和DNA，可保留黄色的有机相）

7、在得到的水相溶液中加入等体积（500ul）的异丙醇，上下颠倒混匀，-20℃ 放置20-30min。
（植物或动物组织RNA提取中，容易沉淀出大量的蛋白等污染物，导致电泳检测时看不到RNA。可以按以下步骤操作减轻污染：在上清中加入1/2体积的异丙醇，1/2体积的RNA助沉剂，然后进行以下操作。）

8、4 ℃ 12 000rpm离心10min，去上清。
（离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。）

9、加入1ml 75%乙醇（DEPC水处理过的水配制）洗涤沉淀。加入后把管子敲一敲，尽量使RNA沉淀飘起来，每使用1ml Trizol至少加1ml乙醇。有时，为避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能过于干燥，否则不易溶解。

10、4 ℃ 12 000rpm离心5min，弃上清；短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。

11、室温放置晾干（不要晾得过干，RNA完全干燥后会很难溶解，大约晾干2-3min左右即可）。加入适量DEPC水（根据实验需要，可加30-100ul水）或0.5%SDS，用枪头吸打几次，充分溶解RNA。50度保温1小时。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅ 的去离子甲酰胺。溶解，-70℃保存。可以分装保存，防止污染，

12、取1ul+1ul buffer 电泳检测RNA完整性，稀释一定倍数，分光光度计测定纯度和浓度。