癌蛋白 c-Myc（Myc） 是一种 DNA 结合型转录因子/转录激活因子，在细胞周期调控、生长、分化、发育等多种细胞功能中发挥关键作用。其失调可使癌细胞逃避生长抑制、免疫清除、促进肿瘤相关炎症并引起基因组不稳定与突变。

由于Myc缺乏传统药物结合口袋的“无结构”蛋白特性，在其被发现的 40 年以来，尚无直接靶向 Myc 的药物获批上市。

近期，深圳湾实验室沈卫军团队开发了首个基于 Myc-NanoLuc 融合质粒转染细胞的高通量筛选体系，用于筛选可下调 Myc 的小分子化合物，并从 ChemDiv 多样性化合物库中筛选出能够选择性降解 Myc 蛋白的化合物 C1。

C1 对高表达 Myc 的癌细胞具有较高的细胞毒性，而对低表达 Myc 的癌细胞影响较小，且能选择性下调多种 Myc 靶基因 的表达。值得一提的是在研究过程中，团队使用了 TargetMol 的产品 EOAI3402143（G9）噢，大佬的选择，值得信赖！

构建并验证靶点-NanoLuc融合蛋白的HTS平台
研究团队先是构建了将 Myc 蛋白 与高稳定性的 NanoLuc 荧光素酶 融合的质粒，建立了首个基于 Myc-NanoLuc 融合质粒转染细胞的高通量筛选体系，用于筛选可下调 Myc 的小分子化合物。随后利用包含17,452 种具有明确生物功能的生物活性化合物库作为测试对象，成功鉴定出两种与癌症相关的临床前小分子抑制剂：

• EOAI3402143（G9）：一种 去泛素化酶（DUB）抑制剂；
• SY-1365：一种 CDK7 抑制剂，同时抑制 CDK9 激酶活性。

它们均可促进 Myc 蛋白降解，验证了该筛选体系的有效性。

▲高通量筛选示意图

C1选择性杀伤Myc高表达肿瘤细胞
利用这一新构建的平台，研究团队接下来从 Chemdiv 化合物库 中进行了大规模筛选（包含108,800个化合物），经过多轮验证，最终确定了 14种能够显著降低内源性 Myc 蛋白水平的新型小分子化合物，并将这14种化合物被命名为 C1–C14。

接下来，团队采用了 CETSA（cellular thermal shift assay，细胞热转移实验）来检测 Myc 与 14 个候选化合物之间的相互作用。结果表明，化合物 C1、C3、C7、C8 和 C11 能够像已知的 Myc 结合剂 MYC361i 一样，在加热条件下显著稳定细胞裂解液中的内源性 Myc 蛋白。而其余 9 种化合物则未表现出明显的稳定作用。
 

▲14 种新型小分子化合物

通过对这5种化合物的多层验证，发现了 C1 能够在细胞水平上 选择性降解内源性 Myc 蛋白及其功能伴侣 Max 蛋白，其降解半效浓度（DC₅₀）约为 5 μM，并对其他蛋白几乎无影响。

• 在无标记定量质谱（LFQ）分析中，C1 仅下调了 269 种蛋白，明显少于其他候选化合物（C7、C8、G9 等），显示出更好的 特异性。
• GO 富集分析结果显示，C1 显著影响了与 蛋白降解相关的生物过程，支持其通过促进蛋白降解机制抑制 Myc 的作用模式。此外，C1 并不抑制 MYC mRNA 的表达，相反，处理后 MYC 转录水平略有上升，进一步证明其作用靶点在蛋白层面而非转录水平。
• 在功能验证中，C1 对高 Myc 表达的癌细胞（如 Ramos、HCT116、K562）具有明显的 选择性杀伤效应，GI₅₀ 值与 Myc 表达水平呈负相关；同时，C1 能 选择性下调 Myc 靶基因（如 CAD、CCNB1、CDK4、TERT、UBE2C）的表达，而对非靶基因（如ACTB、HPRT1）无影响。

▲C1 在较低剂量下优先杀死高 Myc 表达的癌细胞，并选择性地降低 Myc 靶基因表达。

以上结果表明，C1 是一种新型、且特异性强的小分子 Myc 降解剂，能够通过促进 Myc/Max 复合体降解，选择性抑制 Myc 依赖性癌细胞的生长与转录活性，具有潜在的抗肿瘤药物开发价值。

C1作用机制
研究者此前已通过 CETSA 分析确认 C1 可与 Myc 结合，为探究C1的作用机制，研究者构建了 Flag-Myc（f-Myc）质粒，并在不同剂量的 C1 处理下进行 f-Myc 共免疫沉淀（Co-IP）实验，以检测常见的 Myc E3 泛素连接酶（如 FBXW7、CHIP/STUB1）是否可被 f-Myc 拉下形成三元复合物。

结果发现，C1能以浓度依赖的方式诱导c-Myc蛋白发生自聚集，这种自聚集效应伴随着c-Myc/Max异源二聚体的解离。

既往研究表明，Myc/Max 二聚体的解离会使两者失去稳定性，并通过蛋白酶体途径被降解。因此，研究者利用蛋白酶体抑制剂 MG132 来验证该途径是否参与了 C1 诱导的 Myc 降解。发现蛋白酶体抑制剂 MG132 不仅阻止了 DUB 抑制剂 G9 引起的 Myc 降解，也恢复了 C1 介导的 Myc 蛋白水平（见图5C），说明蛋白酶体途径参与了 C1 的 Myc 降解机制。

▲C1 充当分子胶，聚集 Myc 蛋白，阻断 Myc/Max 相互作用，并导致 Myc/Max 蛋白降解

以上结果表明，C1 是一种新型、非典型的 Myc 分子胶降解剂（MGD），能够直接结合 Myc 蛋白并诱导其自聚集，从而阻断 Myc/Max 相互作用，同时通过蛋白酶体（并可能辅以自噬途径）促进 Myc 和 Max 的降解。该作用机制通过 Co-IP、荧光显微以及热转移实验得到验证，显示出 C1 独特的 Myc 聚集型降解特性，与其他 Myc 降解化合物不同，代表了一种全新的 Myc 靶向策略。

小结
综上，该团队通过开发 Myc-NanoLuc 融合质粒转染的细胞高通量筛选（HTS）体系，成功鉴定出能够下调 Myc 癌蛋白的小分子，其中 14 个初筛命中物表现出真实的 Myc 下调活性。

C1 是其中最突出的化合物，它不仅能结合并降解 Myc 蛋白，还能破坏 Myc/Max 相互作用并诱导 Myc 聚集，加速其清除，从而成为一种特异性的 Myc 降解剂。C1 的机制可能属于非典型的分子胶，类似于通过促进靶蛋白聚集来诱导降解的 BI-3802；其作用可能涉及蛋白酶体和自噬途径，但具体参与的 E3 泛素连接酶及分子机制仍需进一步研究。

C1 及其他候选化合物（如 C7、C8）具有一定的脱靶效应，且 C1 含有反应性硝基，但分子量较低（337.3 Da），显示出未来药物化学优化的潜力。总体而言，该研究展示了一种新的 HTS 策略用于发现 Myc 靶向小分子，并初步揭示了 C1 作为非典型 Myc 分子胶降解剂的潜力，为进一步临床开发提供了基础。