酶联免疫斑点技术，即ELISPOT技术，是被用于测定分泌特异性抗体或细胞因子的单个细胞对特异性抗原免疫应答能力的细胞免疫学技术。它集高灵敏度、高通量、单细胞水平、功能性检测等优点，被广泛应用于疫苗免疫原性的效价评估、细胞治疗的效价评估、基因治疗的毒性评估、传染性疾病/自身免疫性疾病的诊断和疗效评估、以及肿瘤治疗的疗效评估、器官移植免疫排斥的研究、以及基础免疫学等的研究中。

ELISPOT技术和ELISA技术都是基于双抗夹心法，但是ELISPOT技术是对单个细胞的功能研究，在整个ELISPOT流程中加入了细胞培养的过程以及斑点分析的流程，这就使整个ELISPOT操作和分析变得复杂起来。为了确保实验操作和分析的客观性，以及实验结果的一致性和可重复性，必须建立一套标准化的流程，包括实验操作的标准化和实验人员的专业培训；样本制备和处理过程的标准化，结果和数据分析流程的标准化等。
作为最早在国内引入ELISPOT技术的生物公司，为了在国内普及ELISPOT技术，达科为和国内外多位ELISPOT专家以及多家ELISPOT试剂和仪器厂家合作，并针对ELISPOT技术标准化流程方面自主开发了一系列产品。是以，达科为可以说是当之无愧的ELISPOT专家。
 

1．样本制备
样本制备中，细胞状态（细胞分离、细胞冻存）、细胞培养（培养基有无血清）、细胞数量和活率对ELISPOT实验都有一定程度的影响。
1.1 细胞分离
ELISPOT检测的是细胞免疫功能，在细胞分离过程中，需要保持细胞存活率，确保细胞功能不受改变。
 

不同脾细胞分离方法对ELISPOT检测的影响（达科为数据）
 

如上图，传统的红细胞裂解法在红细胞裂解的过程中，可能导致不同程度的白细胞损伤，进而影响细胞状态；达科为“达优”品牌分离液专为ELISPOT技术开发安全无毒，确保高纯度淋巴细胞的同时，确保细胞的高活率。

 
1.2 培养基
血清中含有未知的ELISPOT敏感成分（如异嗜性抗体等），既可能抑制斑点的生成，也可能增加噪声斑点。因此，细胞培养时，建议使用无血清培养基。

含血清培养基和无血清培养基对ELISPOT检测的影响（达科为数据）
 

 

冻存细胞存活率对ELISPOT的影响
 

 
1.4 细胞数量和活率
由于ELISPOT技术检测的是分泌细胞因子/抗体等的阳性细胞数或频率，若每孔/每板/每次铺板的细胞数不能保持一致，那得到的斑点数量SFU（斑点形成单元）就没有可比性。另外，细胞状态好坏是ELISPOT结果是否准确可靠的关键因素之一。除了影响结果的准确性，细胞状态不佳还会影响斑点图像的美观性。

因此，确保细胞计数和活率分析的结果准确性以及流程标准化，才能确保实验结果的重复性和可信度。样本细胞的来源主要是外周血或脾脏，即使进行了分离纯化，也不能避免分离后的细胞存在不同程度的红细胞和血小板干扰。故而传统的台盼蓝染色方法并不能真正精确计数淋巴细胞，采用双荧光核染料AO/PI染色可以精准计数淋巴细胞和活率，是ELISPOT检测流程中的推荐选择。
 

细胞计数中任何一个环节发生改变都可能影响细胞计数的结果。
 

达科为公司为ELISPOT操作流程中的细胞计数与活率分析部分提供Cellometer品牌双荧光细胞计数仪，确保结果的准确性与可靠性。
 

<扫描下方二维码申请试用>

 
2. ELISPOT/FluoroSpot试剂盒
高品质、稳定且符合SOP生产流程的ELISPOT/FluoroSpot试剂盒是ELISPOT流程中关键的一环。
达科为公司不仅拥有自主研发的高品质“达优”品牌ELSIPOT试剂盒，同时与全球ELISPOT领域顶尖厂家合作，提供高品质、多种属、多规格的ELISPOT/FluoroSpot试剂盒，以满足不同用户需求。

 

 
3. 斑点计数和数据分析
斑点计数和数据分析是ELISPOT流程的最后一个环节，也是至关重要的一个环节。要确保最后这一至关重要的环节，首先就要保证读板仪的自动化和标准化，减少对实验操作人员经验的依赖，降低主观因素的干扰。

Mabtech公司本身作为全球最大ELISPOT读板仪用户，不满足于市面上现有的读板仪主观性过强、过于依赖操作员经验、操作繁琐复杂且数据结果重复性、一致性差的现状，自主研发推出了新一代的高端型号IRIS ELISPOT/FluoroSpot读板仪与基础型ASTOR ELISPOT读板仪，颠覆了斑点计数算法，推出RAWspot技术，自动定位，自动较准，固定焦距，实现了数据客观标准化，操作简便人性化，是一款真正意义上的科学家为科学家设计/用户为用户设计的新一代读板仪。
 

<扫描下方二维码申请试用>

 

4. 实验人员培训
前面已经提到，ELISPOT操作流程涉及因素较多，同时对实验人员的实验技能也有一定要求。为了确保ELISPOT流程的标准化，实验人员的技能培训是必不可少的环节。
达科为作为最早引入ELISPOT技术的生物公司，以普及ELISPOT技术和标准化为己任，在国内举办了多场ELISPOT技术培训班，从技术理论到实验实操，让更多实验人员系统地学习、掌握ELISPOT技术。
 

5. ELISPOT项目服务平台
如果您的实验室还没有具备开展ELISPOT项目的条件，达科为旗下行健雅生物实验平台拥有强大的专业技术支持团队，可以为您提供读板服务和项目。
 

 
 

6. ELISPOT技术手册


达科为自2005年编纂国内第一本《ELISPOT技术手册》以来，不断改进优化手册内容，现已修订至第六版，全国发行量超3万多册！
《ELISPOT技术手册》内容覆盖ELISPOT/FluoroSpot技术原理/历史以及发展状况；详细描述了ELISPOT实验的整个操作流程以及与ELISPOT实验相关的一系列技术；分析了ELISPOT实验中常见问题及解决方案；谈及了ELISPOT读板仪的发展史和数据处理及结果分析；也总结了ELISPOT流程的标准化与质量控制环节；最后讲述了ELISPOT技术的应用领域和展望。
这不折不扣的是一本ELISPOT届的“武功秘笈”，值得拥有和私藏！

点击链接申请私藏：http://dakewe-equipment.mikecrm.com/HerEt8K
 

 
 

ELISPOT实验从样本制备到最后的数据分析，以及技术服务和技术培训班，每个环节达科为都能提供相应的优质产品与专业服务。
 

---