结合逆转录酶（RTase）产品说明书
2025-03-12 来源:本站 点击次数:246
1. 检测原理
PERT 技术：结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA，通过 PCR 扩增产物并实时监测荧光信号（SYBR Green 染料标记）。
特异性设计：以 MS2 RNA 为模板，通过标准曲线定量逆转录酶活性，间接反映样本中逆转录病毒污染水平。
2. 灵敏度
检测下限：可检测低至 10⁻⁸ 单位 / 微升 的逆转录酶活性（如 AMV-RTase 或 MMLV-RTase）。
病毒颗粒关联：约 10³ 皮单位（pU）逆转录酶活性 对应 70-80 个逆转录酶分子或 1-10 个病毒粒子。
3. 线性范围
标准曲线：覆盖 10⁻³ 至 10⁻⁸ 单位 / 微升（5 个数量级），适用于不同病毒污染水平的样本。
定量准确性：通过 Log ΔRn 相对定量参数，Ct 值与逆转录酶浓度呈强相关性。
4. 特异性
抗干扰设计：加入肝素抑制 DNA 聚合酶活性，避免细胞 DNA 污染导致的假阳性。
病毒类型覆盖：适用于多种逆转录病毒（如 HIV、HTLV 等）的活性检测。
5. 准确性
内参校正：通过标准品建立的线性关系计算样本浓度，误差范围小。
污染控制：操作需在 RNA 酶 - free 环境中进行，使用带滤芯枪头避免交叉污染。
6. 检测限
定性检测限：单管可检测单个逆转录病毒颗粒的活性。
定量检测限：基于荧光阈值（Ct 值）和标准曲线，实现精准定量。
7. 精密度
批内重复性：同一样本多次检测变异系数低（需标准化操作流程）。
批间一致性：不同批次试剂性能稳定（需参考产品说明书验证）。
8. 操作便捷性
一步式操作：逆转录与 PCR 扩增在同一管内完成，减少移液步骤。
时间效率：总耗时约 3-4 小时（含孵育和 PCR 扩增）。
仪器兼容性：适配主流荧光定量 PCR 仪（如 ABI、Roche 等）。
9. 样本类型
适用范围：生物制品（如疫苗）、细胞培养上清液、细胞裂解液等。
特殊要求：需低温操作（4℃）以保护酶活性，避免反复冻融。
注意事项
RNA 质量：样本 RNA 完整性影响检测结果，需确保 RNA 无降解。
假阳性控制：细胞 DNA 污染可能导致非特异性信号，需通过肝素抑制 DNA 聚合酶。
法规合规：符合 WHO 及《中国药典》对生物制品逆转录病毒污染的检测要求。
注：具体参数可能因试剂盒批次和实验条件略有差异，建议严格按照产品说明书操作并进行预实验验证。
PERT 技术：结合逆转录酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA，通过 PCR 扩增产物并实时监测荧光信号（SYBR Green 染料标记）。
特异性设计：以 MS2 RNA 为模板，通过标准曲线定量逆转录酶活性，间接反映样本中逆转录病毒污染水平。
2. 灵敏度
检测下限：可检测低至 10⁻⁸ 单位 / 微升 的逆转录酶活性（如 AMV-RTase 或 MMLV-RTase）。
病毒颗粒关联：约 10³ 皮单位（pU）逆转录酶活性 对应 70-80 个逆转录酶分子或 1-10 个病毒粒子。
3. 线性范围
标准曲线：覆盖 10⁻³ 至 10⁻⁸ 单位 / 微升（5 个数量级），适用于不同病毒污染水平的样本。
定量准确性：通过 Log ΔRn 相对定量参数，Ct 值与逆转录酶浓度呈强相关性。
4. 特异性
抗干扰设计：加入肝素抑制 DNA 聚合酶活性，避免细胞 DNA 污染导致的假阳性。
病毒类型覆盖：适用于多种逆转录病毒（如 HIV、HTLV 等）的活性检测。
5. 准确性
内参校正：通过标准品建立的线性关系计算样本浓度，误差范围小。
污染控制：操作需在 RNA 酶 - free 环境中进行，使用带滤芯枪头避免交叉污染。
6. 检测限
定性检测限：单管可检测单个逆转录病毒颗粒的活性。
定量检测限：基于荧光阈值（Ct 值）和标准曲线，实现精准定量。
7. 精密度
批内重复性：同一样本多次检测变异系数低（需标准化操作流程）。
批间一致性：不同批次试剂性能稳定（需参考产品说明书验证）。
8. 操作便捷性
一步式操作：逆转录与 PCR 扩增在同一管内完成，减少移液步骤。
时间效率：总耗时约 3-4 小时（含孵育和 PCR 扩增）。
仪器兼容性：适配主流荧光定量 PCR 仪（如 ABI、Roche 等）。
9. 样本类型
适用范围：生物制品（如疫苗）、细胞培养上清液、细胞裂解液等。
特殊要求：需低温操作（4℃）以保护酶活性，避免反复冻融。
注意事项
RNA 质量：样本 RNA 完整性影响检测结果，需确保 RNA 无降解。
假阳性控制：细胞 DNA 污染可能导致非特异性信号，需通过肝素抑制 DNA 聚合酶。
法规合规：符合 WHO 及《中国药典》对生物制品逆转录病毒污染的检测要求。
注：具体参数可能因试剂盒批次和实验条件略有差异，建议严格按照产品说明书操作并进行预实验验证。
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