相信很多实验人员在做核酸电泳时碰到过DNA条带不清晰、有重影、拖尾、变形的现象,这些是什么原因导致的呢?接下来总结一下。


(1)DNA 降解。避免核酸酶污染。
(2)DNA 上样量过多。减少凝胶中 DNA 上样量。
(3)电泳缓冲液陈旧: 电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,
pH值上升,
缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。
(4)电泳条件不合适。电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃ ,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。
(5)DNA 样含盐过高;
(6)有蛋白污染。电泳前抽提去除蛋白。
(7)DNA 变性。电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。
(8)琼脂糖胶制作时溶胶不完全以致琼脂糖颗粒残留不均匀、有污染或琼脂糖质量不好;
(9)核酸染料效果下降或者添加量少;
(10)凝胶加样孔形成有问题或者上样时破坏加样孔;
(11)凝胶厚度太厚,超过5mm,也可能会导致条带再电泳过程中扩散;
(12)上样缓冲液不合适;
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