RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒操作指南详细介绍
2025-10-29 来源:本站 点击次数:57
实验准备
1. 植物样品（10-20 mg），研钵，液氮
2. 无水乙醇，β-巯基乙醇
3. 一次性无菌注射器（DNase I 配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头, 离心管
4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴 低温离心机
实验准备-试剂盒准备1
第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。并在加入无水乙醇后在瓶身做好标记。
DNase I 储存液的配制
将DNase I 干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃ 贮存（可保存9个月）。
注意：从-20℃ 融化后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。
实验准备-试剂盒准备2
（此步骤建议在通风橱内操作）
操作前在SL中加入β-巯基乙醇至终浓度为5%，如475 μl SL中加入25 μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的SL 4℃ 可放置一个月，裂解液SL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
操作
Step 1
1、50-100 mg植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末
2、加入500 μl SL，立即涡旋混匀（已加入β-巯基乙醇）
Step 2
12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min
Step 3
将上清液转移至过滤柱CS上(过滤柱CS放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，小心吸取收集管中的上清至新的RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
Step 4
1、缓慢加入0.4倍上清体积的无水乙醇，颠倒混匀（此时可能会出现沉淀），
2、将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中
3、12,000 rpm(~13,400×g)，离心15-30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
Step 5
向吸附柱CR3中加入350 μl 去蛋白液RW1，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
Step 6
DNase I 工作液的配制：
以一个样品为例：取10 μl DNase I 储存液放入新的RNase-free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀（用移液枪轻柔吹打混匀）。如同时提取多个样品，建议混合统一配置DNase I 工作液。如样品较多建议在配置时预留出一定的量，以免因移液器的误差或枪头吸附造成总量不够的情况。
Step 7
向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I 工作液，室温放置15 min。
Step 8
向吸附柱CR3中加入350 μl 去蛋白液RW1，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中
Step 9
向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW（使用前请先检查是否已加入乙醇），室温放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec，倒掉废液，将吸附柱CR3放回收集管中。此步骤去除色素等杂质。
Step 10
重复操作步骤9
Step 11
2、离心后将吸附柱CR3在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（RT、qPCR等）实验。但也不要时间过长以免过分干燥核酸不易溶解或RNA降解。
Step 12
将吸附柱CR3转入试剂盒自带的离心管中，加30–50 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2 min，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。
洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃ ，以防降解。
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