实验室在做琼脂糖核酸电泳实验时使用的经典染色剂是溴化乙锭(EB),使用的成本较低,但是为什么被逐渐替代了呢?这是由于EB的强致癌性,实验产物难以处理,而替代EB的核酸染料在安全性、实验效率及环保性等方面具有显著优势。
一、安全性提升
- 低/无毒性
替代品如达远辰光RedView、GelRed、GelGreen、SYBR Safe等通过分子结构设计(大分子量、油性)或实验证明(艾姆斯氏试验)确认无致癌性,避免EB的强诱变性风险。例如,GelRed的废弃物可直接倒入下水道,无需特殊处理。
- 操作防护简化
低毒染料(如SYBR Safe)无需严格通风橱操作,减少实验人员接触风险。
二、灵敏度与分辨率优化
- 高灵敏度检测
- SYBR Gold:检测限低至20pg DNA,灵敏度是EB的100倍。
- GelRed:电泳后染色灵敏度与EB相当,且对DNA迁移影响更小。
- 多片段兼容性
部分染料(如EvaGreen)可稳定检测从200bp到10kb的DNA片段,优于EB对大片段的分离效果。
三、实验流程便捷性
- 无需脱色步骤
电泳后染色染料(如GelRed)直接观察,省去EB染色后的脱色流程,缩短实验时间。
- 设备兼容性
替代品光谱特性与EB接近(如312nm激发),无需更换成像系统即可使用现有设备。
四、环保与经济性
- 废弃物处理简化
部分染料(如达远辰光RedView、GelRed、GelGreen)通过环保认证,可直接按普通垃圾处理,降低实验室污染风险。
- 长期使用成本低
尽管单价高于EB,但无需额外防护装备(如手套、通风柜),综合成本更具优势。
五、特殊场景优势
- 下游实验兼容性
GelRed染色后的DNA可直接用于胶回收,而EB染色的DNA需脱色处理。
- 抗干扰能力
SYBR Safe对Taq酶等常用分子生物学酶无抑制作用,适合qPCR验证等实验。
总结
替代EB的核酸染料通过
安全性升级(如达远辰光RedView、GelRed、SYBR Safe)、
灵敏度提升(如SYBR Gold)及
操作简化(如无需脱色)等特性,成为现代分子实验的主流选择。