GSPT1是一种翻译终止因子，它通过结合eRF1（真核翻译释放因子1）来识别mRNA上的终止密码子，从而促使翻译完成的蛋白质从核糖体中分离出来。这一过程是细胞内蛋白质合成的重要环节，对维持细胞正常生理功能至关重要。

在肿瘤细胞中，GSPT1的表达水平往往发生异常变化。下调GSPT1可以导致多种肿瘤细胞中关键蛋白的异常表达，进而抑制肿瘤细胞的增殖或诱导其凋亡。这一特性使得GSPT1成为肿瘤治疗的一个潜在靶点。

新型GSPT1降解剂的研发
为了更有效地利用GSPT1作为治疗靶点，科学家们致力于开发能够特异性降解GSPT1的小分子药物。其中，PROTAC（Proteolysis-Targeting Chimeras）技术和MG（Molecular Glue）技术成为了研究的热点。

PROTAC技术通过设计一种特殊的分子，使其能够同时结合靶蛋白（如GSPT1）和E3泛素连接酶，从而促进靶蛋白的泛素化和蛋白酶体降解。而MG技术则利用小分子化合物触发靶蛋白与E3泛素连接酶之间的紧密蛋白相互作用，实现靶蛋白的降解。

案例分享
研究者们基于先前的发现，即GSPT1的耗竭可以导致原代星形胶质细胞的细胞周期延迟，进一步研究GSPT1在胶质母细胞瘤治疗中的潜在作用。

研究方法：
1.使用CC-885（一种能够通过与CRBN结合促进GSPT1降解的药物）处理携带U87胶质母细胞瘤细胞的裸鼠，观察其生存期的变化。CC-885 治疗延长移植 U87 细胞的裸鼠存活时间。将 1 × 106 个表达 iRFP720 的 U87 胶质母细胞瘤细胞移植到裸鼠的脑内。将 50 或 100 mg/kg 的 CC-885 溶解在 DMSO 中，并将等量的 DMSO（作为对照）在第 16、18、20 和 22 天（共 4 次）腹膜内注射给裸鼠。

移植、CC-885 给药和使用体内成像系统 (IVIS) 评估肿瘤大小的图表。B 在第 15 天和第 24 天使用 IVIS 评估肿瘤大小。C 绘制了从移植到死亡的存活期（x 轴）和存活率（y 轴）。n = 5。**P = 0.0021（DMSO vs. 50 mg/kg CC-885），**P = 0.0021（DMSO vs. 100 mg/kg CC-885），和**P = 0.0044（50 vs. 100 mg/kg CC-885），采用 Kaplan–Meier 方法和对数秩检验。D 在第 24 天使用 GSPT1 抗体通过免疫印迹 [n = 3（50 mg/kg CC-885）、2（100 mg/kg CC-885）和 4（DMSO）] 评估 CC885 对脑肿瘤中 GSPT1 表达水平的影响。通过使用 GAPDH抗体的免疫印迹确认蛋白质的比较负载。E 通过免疫染色评估 CC-885 对脑肿瘤的影响。移植的脑肿瘤（WT、经 CC-885 处理的 WT）在第 24 天被移除、固定并嵌入石蜡中。使用 GSPT1、Ki-67 和磷-ERK1/2 抗体对样品进行苏木精-伊红 (HE) 染色和免疫染色（苏木精复染）。n = 5；比例尺：100 μm（HE、GSPT1 和 pERK）和 50 μm（Ki-67）。使用 ImageJ 软件测量脑肿瘤中的 F Ki67 免疫染色指数，并绘制 Ki67 指数。****P < 0.0001，通过单因素方差分析和 Tukey 事后检验。

2.制备GSPT1基因敲除（KO）的U87细胞和稳定过表达FLAG标记GSPT1的GSPT1-KO U87细胞（Rescued GSPT1-KO），并将其移植到裸鼠脑中，比较它们与野生型（WT）U87细胞的生存期。

移植 Rescued  GSPT1-KO  U87 细胞的裸鼠的延长存活期被取消。生成了稳定过表达  GSPT1-FLAG的GSPT1-KO  (A-7)  U87  胶质母细胞瘤细胞。A.通过使用 GSPT1 抗体的免疫印迹法证实Rescued  GSPT1 U87  细胞中  GSPT1-FLAG  的表达与 WT  U87  细胞中 GSPT1-FLAG  的表达相当。通过使用  β-actin  抗体的免疫印迹法证实了蛋白质的比较负载。B  评估并绘制了三种细胞系的生长率（WT和  Rescued  GSPT1-KO  中的 n = 10）。通过双向方差分析和  Tukey  事后检验，WT  和  Rescued  GSPT1-KO  U87  细胞之间没有显著差异。GSPT1-KO(A-7)  细胞的生长曲线作为参考。  C  实验图表将  1  ×  106  GSPT1-KO  以及  Rescued  GSPT1-KO  U87  细胞移植到裸鼠脑内。D  移植有  GSPT1-KO  或  Rescued  GSPT1-KO  U87  细胞的脑肿瘤在第  20  天取出、固定、嵌入石蜡中，并对  GSPT1  进行免疫染色（n  =  5）。比例尺：100  μm。E  绘制了从移植到死亡的存活期（x  轴）和存活率（y  轴）。n  =  5；**P  =  0.0018，采用  Kaplan-Meier  方法和对数秩检验。

3.检测GSPT1-KO U87细胞与WT U87细胞相比的凋亡情况，以及GSPT1-KO U87细胞移植的脑肿瘤与WT和拯救GSPT1-KO U87细胞移植的脑肿瘤相比的凋亡情况。

GSPT1-KO U87细胞对凋亡的敏感性。A、B、WT和GSPT1-KO U87胶质母细胞瘤细胞在62.5-500 nM浓度的斯塔乌罗辛（staurosporine）作用下9小时。为了评估细胞凋亡，WT和GSPT1-KO U87细胞裂解液通过抗PARP1抗体进行免疫印迹（A）。在每种斯塔乌罗辛浓度（250、375和500 nM）下，PARP1的裂解片段通过α-微管蛋白进行归一化并绘制（B）。C-F、将WT U87细胞或经CC-885处理的WT U87细胞（C，第24天）以及WT、GSPT1-KO或恢复的GSPT1-KO U87细胞（E，第20天）移植到脑肿瘤中。将样本从体内取出，固定并包埋在石蜡中。使用抗cleaved caspase-3抗体进行免疫染色。

4.患者脑胶质瘤样本中GSPT1的表达情况，以及表达水平与患者预后的关系。

A-C 展示了3名患者脑胶质瘤样本的GSPT1蛋白表达情况。上层图为钆增强的MR图像。中间和下层图展示了GSPT1免疫染色与苏木精复染的显微照片。患者1为60岁男性，肿瘤位于右侧额叶前部。患者2为64岁男性，肿瘤位于左侧额叶。患者3为59岁男性，肿瘤位于右侧顶叶。GSPT1在脑胶质瘤细胞的胞浆中表达。值得注意的是，GSPT1在血管细胞中不表达。患者1和2的GSPT1表达较强；然而，患者3的GSPT1表达较弱至中等。每个显微照片底部左方的数字代表GSPT1 mRNA在实时RT-PCR分析中的相对表达值。GSPT1免疫染色水平与相对mRNA表达值之间无相关性。上层图尺度条为100微米（上层图）和50微米（下层图）。D 比较了GSPT1免疫染色水平与GSPT1 mRNA相对表达值之间的关系。Kaplan-Meier曲线显示根据胶质母细胞瘤样本中GSPT1的mRNA表达水平将患者分为两组。将87例胶质母细胞瘤患者按照GSPT1表达值的中位数进行分组。GSPT1high：GSPT1表达值高于中位数。GSPT1low：GSPT1表达值低于中位数。左侧图：神户大学医院的数据集。右侧图：TCGA胶质母细胞瘤2013（https：//www.cbioportal.org/）的数据集，可自由获取。

结论

• CC-885处理的裸鼠相较于对照组有显著更长的生存期，表明GSPT1的降解能够抑制脑肿瘤的生长并延长生存期。
• GSPT1-KO U87细胞和Rescued GSPT1-KO U87细胞在裸鼠脑中的移植实验显示，GSPT1的缺失能够延长生存期，而过表达GSPT1则没有这种效果。
• GSPT1-KO U87细胞和GSPT1-KO U87细胞移植的脑肿瘤表现出增强的凋亡，说明GSPT1的缺失或降解使胶质母细胞瘤细胞更容易死亡。
• 尽管在胶质母细胞瘤患者样本中检测到GSPT1的表达，但GSPT1 mRNA水平与总体生存期之间没有相关性，提示GSPT1对胶质母细胞瘤细胞的生长至关重要，但可能与其恶性特征无关。
• 研究者们提出GSPT1是一个潜在的胶质母细胞瘤治疗靶点，但其作为翻译终止因子的功能可能带来意外的副作用，因此需要进一步研究以开发出最小化非靶向效应的新型药物。

展望
基于GSPT1在肿瘤细胞中的重要作用以及近年来在药物研发领域的快速进展，GSPT1在肿瘤治疗中的应用前景十分广阔。未来，随着对GSPT1功能机制的深入研究以及新型靶向药物的不断涌现，GSPT1有望成为肿瘤治疗领域的一个重要靶点，为癌症患者带来新的治疗希望和选择。

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验证数据
GSPT1蛋白：高活性，高纯度验证

The GSPT1 activity was detected using HTRF technology. The reaction was performed by incubating the GSPT1 protein, CRBN and varying concentration of CC-885 and beads at 25℃ for 60 min,  then reading ratio 665/620 on BMG.

纯度＞90%

GSPT1抗体:WB, IP, ICC等多重验证

E3泛素连接酶:DDB1/CRBN Complex

The CRBN/DDB1 activity was detected using HTRF technology. The reaction was performed by incubating the varying concentration of lenalidomide, CRBN/DDB1 protein, substrate and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620 with BMG.

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