《小虫子,哪里跑!》——疾控中心寄生虫病实验室检验方案介绍
2024年4月,为了落实《“健康中国2030”规划纲要》提出的“全国所有流行县基本控制包虫病等重点寄生虫病流行”防治目标,全面推进重点寄生虫病的控制与消除进程,减少寄生虫病危害,保障群众健康,国家疾控局等15个部门制定了《全国包虫病等重点寄生虫病综合防治实施方案(2024—2030年)》并印发给各相关政府单位。
在疾病预防控制体系中,疾控中心寄生虫病实验室占据着极为重要的地位,肩负着多项重要职责,不仅要为制定和完善寄生虫病相关的法律法规、政策、标准等提供坚实的技术支撑,还要承担全国寄生虫病预防控制工作的业务指导任务,此外,还需负责寄生虫病的应急处置、科学研究、国际合作等诸多事务。它就像是一个精密的 “侦察站”,专注于寄生虫病的监测、预防与控制,为守护公众健康筑起一道坚固的防线。
寄生虫病实验室检测方法:
寄生虫病的实验室检查包括病原学检查、免疫学检查和分子生物学检查。
病原学检查
病原学检查时指通过采集患者的血液、组织液、组织、粪便等标本,用过显微镜等直接观察,或在处理、染色后观察,以发现寄生虫虫体或虫卵作为诊断依据,有时候还需要进行寄生虫那个体外培养或动物接种后再进行病原学检查。
1.1直接观察法
薄血膜法 制涂片后使用姬萨姆染色或瑞氏染色等方法染色后,行显微镜检查;常用于检查血液内的疟原虫、微丝蚴、锥虫、弓形虫、巴贝西虫等。
厚血膜法 制厚血膜后片,干燥后用蒸馏水溶血,再干燥后染色进行镜检。
组织取材检查 收集患者的组织样本,将高度怀疑含有寄生虫的病例组织送至病理科进行鉴别诊断,通常用苏木精-伊红染色检查寄生虫。本法可用于旋毛虫、盘尾丝虫、罗阿丝虫及其他虫体的检查。
粪便0.9%氯化钠溶液直接涂片法 制片后直接置于显微镜下观察,本法主要应用于检测大鼠、小鼠、豚鼠等实验动物肠道鞭毛虫和纤毛虫。
粪便直接涂片染色法 本法主要为碘液染色。涂薄样品盖片后直接在显微镜下观察。此法常用于犬、猴溶组织内阿米巴包囊等原虫包囊的检测,显微镜下发现包囊即为阳性。
粪便厚涂片法 使用世卫组织推荐的改良加藤法(Kato-Katz厚涂片法)虫卵计数进行镜下定量检测。该方法适用于多蠕虫卵的定量检测。
虫卵浓集法
1.2.1 重力沉淀法 利用各种蠕虫卵和原虫包囊比重大于水儿自然沉降的原理达到富集目的。最终取沉渣样本进行镜检。
1.2.2 醛醚沉淀法 样品加醛醚制样后离心分层样本,取细渣层镜检(查包囊是加一滴碘液)。
1.2.3 碘醛液离心沉淀法 配置MIF液和卢戈碘液后制样,离心分层取沉淀层进行镜检。此法适用于检查蠕虫卵、原虫包囊、滋养体。
1.3 虫卵漂浮法(一个中类在文章页面中单独弄一个框,文字内容在框里上下滑动,不要平铺出来)
1.3.1 饱和氯化钠溶液漂浮法 制样后镜检
1.3.2 硫酸锌离心漂浮法 取样制样后离心分层,取表层液膜2~3次,置于载玻片上镜检。
1.3.3 蔗糖离心浮聚法 取样过滤离心,参照饱和氯化钠溶液漂浮法,取载玻片表面膜镜检。适用于检查粪便中隐孢子虫卵囊。
1.3.4 氯化锌溶液漂浮法 样品加入氯化锌溶液混匀,离心静置后取上层清液制片镜检。此法适用于犬、猫等动物细粒棘球绦虫的检测。
1.4 幼虫孵化法
毛蚴孵化法、常规沉孵法、棉析毛蚴孵化法、钩蚴培养法
1.5 肛门拭子法
2.免疫学检查
2.1 侧流免疫层析检测(lateral flow immunochromatographic assay, LFIA) (一个中类在文章页面中单独弄一个框,文字内容在框里上下滑动,不要平铺出来)
2.2 免疫荧光检测 免疫荧光检测是结合免疫学技术和荧光染色方法的检测方法,包括间接免疫荧光技术(IFA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)和补体法。检测原理是用已标记了荧光素的荧光抗体或抗原作为探针,与组织或细胞标本内相应的抗原或抗体结合成的抗原-抗体复合物,可在荧光显微镜下进行肉眼观察,标本中受激发光照射而发出的荧光还可以被定量检测。作为一种成熟的方法,免疫荧光检测具有可靠、快速、灵敏、适应性好等有点,常用于临床寄生虫病的诊断、流行病学调查和治疗后的复查,目前弓形虫病等许多人体寄生虫病均已用免疫荧光检测进行常规临床诊断。
2.3 免疫磁珠酶联免疫分析法 常作为大型全自动免疫分析仪的检测方法,但是需要较完善的实验室环境。
2.4 免疫传感器技术 生物传感器借住固定化的生物识别分子和能量转换器,将生化信号转化为电信号,可达到直接检测的目的。此种方法需要比较昂贵的仪器来辅助,目前仅适用于实验室检查。
2.5 酶联免疫吸附试验
3 分子生物学检查
目前,聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术已有了长足的发展,成为分子生物学领域最常用的方法之一。
3.1 PCR技术
3.2 等温扩增技术
各种寄生虫检验方法方法联合狙击,共筑防检寄生虫病的健康长城,各自在寄生虫病的诊断中发挥着重要作用。
因此,为了高效完成各项工作任务,疾控中心寄生虫病实验室配备了多种先进的仪器设备。其中,显微镜作为实验室的经典设备,在寄生虫检测中发挥着不可替代的作用。生物显微镜可以帮助工作人员在高倍观察下,清晰地看到寄生虫的微观形态,如虫卵的大小、形状、颜色以及内部结构等细节特征,为鉴定寄生虫种类提供直接证据。而且,一些配备了偏光附件的生物显微镜,能更好地观察具有晶体结构的寄生虫成分,提升检测的准确性。除了显微镜,实验室还拥有离心机、PCR 扩增仪、核酸测序仪等一系列设备,它们相互配合,全方位保障寄生虫病检测与研究工作的顺利开展。
MSHOT明美显微镜能够在显微镜端提供完整的设备解决方案,能够助力疾控寄生虫病实验室高效精准的开展试验。
正置
生物显微镜,可以提供良好的明场观察效果,根据不用的样本可以匹配不同型号的显微镜,可选ML11 / ML31 / ML45 / ML51-N。
生物显微镜ML51-N:40X-1000X放大,高数值孔径半复物镜,成像锐利;编码式5孔物镜转盘,1μm超微调焦精度,适合精细观察;10X/23mm大视野目镜,样本覆盖更广
数智化生物显微镜ML45:放大40X-1000X,编码式物镜转盘,亮度记忆,LED数显屏,显示当前工作状态,ECO人走灯灭,可升级相差,暗场,简易偏光和荧光观察
生物显微镜ML31:无限远光学系统,40x-1000X放大,平场消色差物镜,可升级相差,暗场,简易偏光和荧光观察
体视显微镜MZ62/MZX100搭配斜射光透射底座方案,适合看到透明度高的寄生虫样品如蛔虫、钩虫等。
体视荧光显微镜MZX100:大变倍范围的无限远光学体视荧光显微镜,采用优质的伽利略平行双光路设计,分辨率高色彩真实,有丰富的配件选项,变倍比高达1:10。
体式显微镜MZ62:符合人体工程学设计;可相机镜下同步观察,无需来回切换;灵活适配不同大小样品;标配22mm大视场目镜,镜下视野平展宽广减少眼睛疲劳;高眼点设计,无需摘眼镜也可观察;屈光度可调,保证双目镜下同步清晰。
正置荧光显微镜MF43-N / MF31 ,搭配长寿命LED光源模组,成像清晰锐利,适合进行样本的荧光观察:
研究级
正置荧光显微镜MF43-N: 研究级正置荧光显微镜MF43-N配备6孔落射荧光模块和超长寿命LED荧光光源,可扩展升级实现各种观察方式,高数值孔径半复消色差物镜成像清晰,尤其适合免疫荧光、FISH荧光原位杂交等应用。
正置
荧光显微镜MF31:正置荧光显微镜MF31采用无限远平场消色差物镜和大视野目镜,可用双目或三目观察,搭配LED荧光激发装置,实现明场和荧光显微观察。
*本文部分样品图片来源于网络,侵删
*本文部分内容参考[1]蔡祺,王剑飚.寄生虫病的实验室检查方法[J].检验医学,2021,36(10):1001-1007+992.侵删。