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猫红细胞单克隆抗体的基础特性、制备流程及应用场景

2025-07-01     来源:本站     点击次数:107

猫红细胞单克隆抗体（Feline Red Blood Cell Monoclonal Antibody，fRBC-McAb）是针对猫红细胞表面特异性抗原制备的单克隆抗体，凭借其特异性强、均一性高等特点，在猫血型鉴定、输血安全保障、免疫性血液病诊断及相关研究中发挥着关键作用。以下从基础特性、制备流程、应用场景等方面详细介绍：
 
一、猫红细胞与 fRBC-McAb 的基础特性
  • 猫红细胞的抗原特征：猫红细胞表面存在多种独特抗原，其中AB 血型系统是最主要的血型系统（分为 A 型、B 型、AB 型），由红细胞表面的糖蛋白抗原决定（A 型为 N - 乙酰神经氨酸，B 型为神经氨酸）；此外还有 Mik 血型系统等次要抗原。这些抗原是引发猫输血反应的核心因素（如 B 型猫接受 A 型血会发生严重溶血），也是 fRBC-McAb 的主要靶向对象。
  • fRBC-McAb 的核心特性：由单一 B 淋巴细胞克隆分泌，仅识别猫红细胞表面特定抗原的单一表位，具有特异性极强（可精准区分 A 型、B 型等不同血型抗原）、批次稳定性高（避免多克隆抗体成分复杂、批间差异大的问题）、可标准化生产等优势，为猫红细胞相关研究和临床应用提供了可靠工具。
二、fRBC-McAb 的制备流程
  1. 免疫原制备与动物免疫：
    • 免疫原处理：采集健康猫的新鲜抗凝血（需明确血型，如 A 型或 B 型猫血），用生理盐水或 PBS 反复洗涤（去除血浆、白细胞等杂质），制备纯化的猫红细胞悬液（浓度通常为 2-5%）。
    • 动物免疫：常用 Balb/c 小鼠，通过腹腔或静脉注射进行免疫。采用 “初次免疫 + 多次加强免疫” 策略（间隔 1-2 周），最后一次加强免疫后 3-5 天取脾脏细胞，用于细胞融合。部分情况下可添加佐剂（如弗氏佐剂）增强免疫应答，但需注意避免对红细胞抗原的破坏。
  2. 细胞融合与杂交瘤筛选：
    • 融合操作：将免疫小鼠的脾脏 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞（如 SP2/0）通过聚乙二醇（PEG）或电融合技术融合，形成杂交瘤细胞。
    • 筛选培养：利用 HAT 选择培养基（含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）筛选存活的杂交瘤细胞（未融合的骨髓瘤细胞和 B 淋巴细胞因代谢缺陷无法存活）。
  3. 阳性克隆鉴定与克隆化：
    • 鉴定方法：通过凝集试验（如试管法或玻片法）检测杂交瘤细胞上清液与不同血型猫红细胞的反应（如抗 A 型 fRBC-McAb 应仅与 A 型红细胞发生凝集）；或采用流式细胞术（标记荧光二抗后检测荧光信号）验证抗体与红细胞表面抗原的特异性结合。
    • 克隆化培养：对阳性细胞株通过有限稀释法或单细胞克隆技术进行多次克隆，确保获得能稳定分泌目标抗体的单克隆细胞株。
  4. 抗体生产与纯化：
    • 小规模生产：将杂交瘤细胞腹腔注射到预处理（如注射降植烷）的 Balb/c 小鼠，收集腹水，经离心、饱和硫酸铵盐析或蛋白 A/G 亲和层析纯化，获得高纯度抗体。
    • 大规模生产：通过生物反应器体外培养杂交瘤细胞，从培养液中纯化抗体，适用于诊断试剂盒的工业化生产。
三、主要应用领域
  1. 猫血型鉴定与输血安全：
    • 猫 AB 血型系统中，B 型猫血清中天然存在高滴度抗 A 抗体，若输入 A 型血会引发急性溶血反应（死亡率极高）；A 型猫接受 B 型血也可能出现轻度反应。fRBC-McAb（如抗 A 型、抗 B 型单克隆抗体）可通过快速凝集试验精准鉴定猫血型（如抗 A 型抗体与待检红细胞凝集则为 A 型），是保障猫输血安全的核心工具。
    • 应用示例：流浪猫救助中，对需要输血的猫用 fRBC-McAb 快速分型，确保供血猫与受血猫血型匹配（如 A 型猫接受 A 型血，B 型猫接受 B 型血）。
  2. 免疫介导性溶血性贫血（IMHA）的诊断：
    • IMHA 是猫常见的自身免疫性疾病，患病猫体内产生抗自身红细胞的抗体，导致红细胞被破坏。fRBC-McAb 可通过直接抗球蛋白试验（DAT，即 Coomb’s 试验） 检测红细胞表面吸附的自身抗体：若待检红细胞与 fRBC-McAb 反应出现凝集，提示存在自身抗体，辅助确诊 IMHA。
  3. 猫血型相关研究：
    • 作为特异性探针，研究猫 AB 血型抗原的分子结构（如糖链修饰差异）、遗传机制（如 AB 型的遗传模式）及与疾病的关联（如某些品种猫的血型分布特点）。
    • 用于探索猫红细胞抗原在免疫应答中的作用，如 B 型猫抗 A 抗体的产生机制。
  4. 诊断试剂盒开发：
    • 基于 fRBC-McAb 开发标准化的猫血型检测试剂盒（如试纸条、微量板法试剂盒），操作简便、结果快速，适合临床一线使用（如宠物医院、动物救助站）。
    • 用于开发 IMHA 诊断试剂盒，提高疾病诊断的准确性和效率。
四、优势与注意事项
  • 核心优势：
    • 特异性精准：可专一识别 A 型或 B 型等特定血型抗原，避免交叉反应（如不与其他物种红细胞反应），确保血型鉴定结果可靠。
    • 标准化程度高：批间差异小，适合大规模临床应用和试剂盒生产，克服多克隆抗体（如 B 型猫血清抗 A 抗体）供应不稳定、效价波动大的问题。
  • 注意事项：
    • 抗原表位匹配：不同 fRBC-McAb 可能识别同一抗原的不同表位，需根据应用场景验证（如血型鉴定需确保抗体与目标血型抗原的强反应性）。
    • 保存条件：纯化后的抗体需在 - 20℃冻存，避免反复冻融；使用前需通过凝集试验验证活性，确保有效性。
五、应用前景
随着宠物猫饲养量增加，猫输血需求和免疫性疾病诊断需求日益增长。fRBC-McAb 的开发解决了传统血型鉴定方法（如利用 B 型猫血清作为抗 A 试剂）的局限性（如血清来源不稳定、特异性不足）。未来研究可聚焦于：
  • 开发针对猫次要血型抗原（如 Mik 抗原）的 McAb，完善血型检测体系（部分猫因 Mik 抗原不匹配可能发生迟发性输血反应）；
  • 探索 fRBC-McAb 在 IMHA 靶向治疗中的潜力（如通过抗体中和自身抗体，减少红细胞破坏）。
相关公司： 费雪（杭州）医学研究有限公司
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